caspase-3-sirna預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究

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1、蘇州大學碩士學位論文Caspase-3-siRNA預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究姓名：郝曉斌申請學位級別：碩士專業(yè)：心胸血管外科學指導教師：鄭世營20090501Caspase-3·siRNA預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究中文摘要Caspase．3．siRNA預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究中文摘要目的：研究Caspase．3．siRNA預(yù)處理在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的保護作用與機制。方法：78只雄性SD大鼠隨機分為4組：即空白組、對照組、Scrambled．siRNA組和Cas

2、pase．3．siRNA組。Caspase．3．siRNA組和Scrambled．siRNA組：可逆性結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支建立心肌缺血再灌注模型。在缺血前即刻、12h、24h分別采用水壓法尾靜脈注射Caspase．3．siRNA或Scrambled．siRNA預(yù)處理。對照組和空白組：建立動物模型同上，但空白組只穿線不阻斷左冠狀動脈前降支。采用上述相同方法尾靜脈注射PBS緩沖液。各組左冠狀動脈前降支阻斷30min后恢復(fù)再灌注，分別于再灌注2h、6h、12h、24h腹腔麻醉后腹主動脈采血檢測血清肌酸激酶同工酶(CK．MB)和乳酸脫氫

3、酶(LDH)活性，并在處死大鼠后取左室前壁心肌組織TUNEL法檢測心肌細胞凋亡指數(shù)。再灌注24h檢測心肌細胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測Caspase．3mRNA表達水平，Westernblot法檢測Caspase一3蛋白表達水平。光學顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察再灌注后心肌組織結(jié)構(gòu)的病理學變化。空白組只設(shè)24h一個時間點作為總體對照，檢測指標同上。結(jié)果：(1)隨著再灌注時間延長，除空白組外各組血清CK．MB及LDH水平逐漸升高。CK．MB在再灌注6h達到高峰，在12--一

4、24h逐漸下降，LDH在再灌注12h達到高峰，并且在再灌注24h仍維持在較高水平。在各時間點CK．MB和LDH水平，對照組和Scrambled．siRNA組高于Caspase．3．siRNA組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，而Scrambled．siRNA組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。(2)TUNEL法檢測結(jié)果顯示，心肌細胞凋亡指數(shù)隨著再灌注時間延長呈漸增趨勢，再灌注12h達到高峰，至再灌注24h仍維持在較高水平。各時間點對照組和Scrambled．siRNA組凋亡指數(shù)明顯高于Caspase．3．siRNA組(

5、P<0．05或0．01)，而Scrambled．siRNA組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。(3)Caspase．3．siRNA組SOD活性高于對照組和ICaspase-3．siRNA預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究中文摘要Scrambled．siRNA組(P<0．05)，而MDA含量低于對照組和Scrambled．siRNA組(P<0．05)。SOD活性或MDA含量在對照組和Scrambled．siRNA組間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。(4)RT-PCR檢測結(jié)果顯示：Caspase．3．s

6、iRNA組Caspase．3mRNA表達量低于對照組和Scrambled．siRNA組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，而Scrambled．siRNA組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。(5)Westernblot檢測結(jié)果顯示：各組Caspase．3蛋白均有所表達，Caspase．3．siRNA組Caspase-3蛋白表達量低于對照組和Scrambled．siRNA組(P<0．05)，表達明顯受到抑制。(6)光鏡顯示空白組心肌纖維排列規(guī)則，細胞核結(jié)構(gòu)完整，為正常心肌組織結(jié)構(gòu)。對照組心肌纖維排列紊亂，細胞核不規(guī)則，胞漿著色

7、深。間質(zhì)明顯水腫，有炎癥細胞浸潤。Scrambled．siRNA組心肌組織病理改變同對照組相似。Caspase．3．siRNA組心肌組織損傷相對較輕，心肌纖維排列較規(guī)整，間質(zhì)水腫不明顯，間質(zhì)內(nèi)可見少量炎癥細胞浸潤。(7)透射電鏡顯示空白組心肌細胞結(jié)構(gòu)基本正常，肌原纖維平行排列，肌節(jié)清晰，線粒體形態(tài)一致呈橢圓形，細胞核結(jié)構(gòu)正常，而對照組和Scrambled．siRNA組均可見肌原纖維排列紊亂、斷裂。線粒體腫脹或固縮，嵴溶解，部分線粒體空化。細胞核內(nèi)染色質(zhì)邊集，細胞質(zhì)水腫明顯。Caspase。3．siRNA組細胞結(jié)構(gòu)損傷較輕，可見肌原纖

8、維排列較規(guī)則，無明顯溶解、斷裂，線粒體形態(tài)接近正常，核內(nèi)核仁清楚。結(jié)論：(1)心肌缺血再灌注損傷誘發(fā)了心肌細胞凋亡，Caspase．3參與了心肌細胞凋亡過程，并在這一過程中發(fā)揮了重要作用。(2)Caspase．3．siRNA預(yù)處理對缺