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《r-spondin1蛋白在腸缺血再灌注損傷后腸黏膜表達及其作用機制》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文R-spondin1蛋白在腸缺血再灌注損傷后腸黏膜的表達及其作用機制姓名：殷剛申請學位級別：碩士專業(yè)：普通外科指導教師：吳承堂20090525碩士學位論文R．spondinl蛋白在腸缺血再灌注損傷后腸黏膜的表達及其作用機制碩士研究生：殷剛指導教師：吳承堂副教授摘要目的本研究以小鼠腸道缺血再灌注損傷模型為基礎，在腸缺血再灌注損傷(intestinalischemia-reperfusioninjury，IIR)后分別檢測小腸黏膜R-Spondin(RSp01)蛋白和B一鏈接素(B-Catenin)的分布特征和變化規(guī)律。探討在IIR過程中腸道上皮和腸上皮干細胞的變化規(guī)律，
2、RSpol對0-Catenin在分子水平的影響，從而理解RSpol對小腸上皮絨毛區(qū)成熟細胞的作用和隱窩干細胞增殖分化可能發(fā)揮的生物學作用及其作用機制。方法1動物健康雄性昆明種小鼠50只(購于南方醫(yī)科大學動物實驗中心)，體重(20±2)g。2模型制作及分組隨機分為對照組(10只)和實驗組(40只)。實驗組每只小鼠以無創(chuàng)傷血管夾夾閉腸系膜上動脈，20min后松夾并關腹。松夾后再分為4個亞組：A組再灌注6h，B組再灌注12h，C組24h和D組48h。對照組行單純剖腹手術。3標本采集和實驗方法制模后于相應時間點經心臟采血0．8mL后處死，將血液離心后取血清0．4mL備用。取距離回盲部5cm小腸12c
3、m作檢測：2cm加入1096甲醛溶液固定12小時，HE染色后在帶目鏡測微尺的顯微鏡下隨機選取10根結構完整的腸絨毛，測量其絨毛高度。4cm小腸小腸勻漿后分別用于紫外分光光度法檢測二胺氧化酶(Diamineoxidase，DAO)，酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme．1inkedimraunosorbcntassay，ELISA)方法檢測RSpol。剩余6cm標本放入RNhlater溶液，至于-80"(2冰箱保存，待行逆轉錄聚合酶鏈式反應(ResversetranscriptionPolymerasechainreaction，RT—PcR)檢測RSpol和B-Catenin。4統(tǒng)計學處理實驗數(shù)據(jù)
4、以均數(shù)±標準差標示，采用完全隨即設計資料的方中文摘要差分析，SPSSl3．0軟件進行統(tǒng)計學處理。結果1IIR后小腸絨毛高度變化對照組小腸絨毛高度明顯高于實驗組。再灌注后4個亞組小腸絨毛高度呈逐漸遞增趨勢，A組絨毛高度最低，顯著低于對照組(233．91±13．13VS371．25±22．14，P<0．01)；B組絨毛高度較前有所增加，仍顯著低于對照組(262．45±17．37VS371．25±22．14，P<0．01)。C組絨毛高度增加最多，達到(56．14±9．02)um，但低于對照組(316．59±16．21VS371．25±22．14，尸<0．01)：D組絨毛高度繼續(xù)增加，低于對照組(3
5、44．06±15．70VS371．25±22．14，P<0．05)。2DAO活性2．1小腸勻漿DAO活性IIR后小腸勻漿DAO表達均低于對照組，但表達呈遞增趨勢。其中以A組下降最明顯，顯著低于對照組(0．28±0．05VS0．36±0．18，／2<0．01)；B組較前有所增加，仍顯著低于對照組(0．30±0．06VS0．36±0．18，尸0．05)。2．2小鼠血清DAO活性變化IIR后小鼠血清
6、DAO活性與小腸勻漿DAO變化趨勢相反。實驗4個亞組血清DAO活性均較對照組高，其中A組DAO活性最高，明顯高于對照組(0．42±0．11VS0．13±0．05，／2<0．01)；B組、C組DAO表達依次減少，和對照組比較B組(0．37±0．09VS0．13±0．05)PO．05)。3ELISA結果與對照組相比，RSpol在A組表達最低(0．35±0．02VS0．39±0．01，尸<0．01)，B組表達逐漸增多(O．36±O．02VS0．39±0．Ol
7、，尸<0．01)。隨時間延長，C組表達達到峰值，并明顯高于對照組(0．41±0．03VS0．39±0．Ol，尸<0．01)。D組表達迅速降低，并顯著低于對照組(0．35±0．OlVS0．39±0．Ol，尸<0．01)。各處理組總體均數(shù)有顯著差異(盧15．73，P
