內(nèi)耳免疫反應(yīng)中細(xì)胞凋亡及caspase-3表達(dá)的研究

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1、中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果．據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意．申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任．論文作者簽名：顯狐日期：2五：6：竺中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)．本人

2、保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)．學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文．論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：·中文論著摘要·內(nèi)耳免疫反應(yīng)中細(xì)胞凋亡及Caspase一3表達(dá)的研究自身免疫性內(nèi)耳病(autoimmuneinnerCalfdisease，ALES)是一種新的疾病實(shí)體，是目前少數(shù)幾種經(jīng)恰當(dāng)治療可獲得較好療效的內(nèi)耳病之一．研究證實(shí)凋亡是許多內(nèi)耳疾病發(fā)生、發(fā)展的共同基礎(chǔ)

3、之一，其中Caspase-3是關(guān)鍵的效應(yīng)分子，它能使許多與細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞周期及DNA修復(fù)等相關(guān)的蛋白或激酶失活，從而使細(xì)胞凋亡。本試驗(yàn)建立了Ⅱ型膠原誘導(dǎo)產(chǎn)生的大鼠自身免疫性內(nèi)耳病模型，探討內(nèi)耳免疫反應(yīng)與凋亡之間的相關(guān)性，從而為預(yù)防和治療自身免疫性內(nèi)耳病探索一條可行之路。目的建立II型膠原誘導(dǎo)產(chǎn)生的大鼠自身免疫性內(nèi)耳病模型，研究?jī)?nèi)耳免疫反應(yīng)中是否存在凋亡，以及細(xì)胞凋亡是否與Caspase-3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。方法選用耳廓反射靈敏的健康雌性SD大白鼠60只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組、佐劑組和對(duì)照組。其中實(shí)驗(yàn)組30只，首次皮下注射Ⅱ型膠原(400微克)與完全弗式佐劑(completefreundadj

4、uvant，CFA)的乳濁液0．2ml，以后每周皮下注射II型膠原(200微克)與不完全弗式佐劑(incompletefreundadjuvant，IFA)的乳濁液0．1ml。佐劑組15只，首次皮下注射CFA0．2ml，以后每周皮下注射IFA0．1ml。對(duì)照組15只予以等量生理鹽水。免疫六周后，觀察兩周，于首次給藥前一天和末次給藥后一天行畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射榆測(cè)(distortionproductotoacousticemission，DPOAE)；末次畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射檢測(cè)結(jié)束后取眼內(nèi)眥血行血清學(xué)檢測(cè)；處死動(dòng)物，取耳蝸行基底膜鋪片光學(xué)檢查；取耳蝸?zhàn)霰鶅銮衅ㄟ^TUNEL法檢測(cè)內(nèi)耳凋亡

5、細(xì)胞，免疫組化檢測(cè)內(nèi)耳Caspase．3的表達(dá)。結(jié)果1、DPOAE幅值檢測(cè)免疫后，實(shí)驗(yàn)組部分鼠DPOAE幅值在1、2、4、6、8kHz較用藥前明顯下降(P

6、漸加重；對(duì)照組、佐劑組及實(shí)驗(yàn)組中未出現(xiàn)聽力下降者可見毛細(xì)胞排列規(guī)整，細(xì)胞間隔均勻，纖毛清晰。邊界清楚，基本正常。4、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果免疫成模組動(dòng)物切片Corti器、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、血管紋和螺旋韌帶上都有較強(qiáng)的Caspase-3蛋白表達(dá)；佐劑組、對(duì)照組及免疫未成模組Caspase-3表達(dá)陰性。5、TUNEL染色結(jié)果免疫成模組Corti器、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、血管紋和螺旋韌帶上均可見TUNEL陽性細(xì)胞；Corti器中TUN-EL陽性細(xì)胞主要見于外毛細(xì)胞和支持細(xì)胞；對(duì)照組、佐劑組及免疫未成模組切片僅在支持細(xì)胞、血管紋和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)極少數(shù)TUNEL染色陽性細(xì)胞。結(jié)論1、內(nèi)耳免疫反

7、應(yīng)可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。2、內(nèi)耳免疫反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生中有Caspase．3的激活。關(guān)鍵詞自身免疫：內(nèi)耳；細(xì)胞凋亡；Caspase．32·英文論著摘要·AStudyonApoptosisandCaspase-3ExpressionintheImmuneResponseofInnerEarAIEDiSanewkindofdisease，oneofafewinnereardiseasesWhichcanbecurediftreatedproperly．Studyshowstha