卵泡發(fā)育過程中γ氨基丁酸作用的初步探討

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1、碩士學(xué)位論文卵泡發(fā)育過程中Y一氨基丁酸作用的初步探討碩士研究生：劉曉艷指導(dǎo)教師姓名：邢福祺摘要Y一氨基丁酸(Y—gamma-aminobutyricacid，GABA)是由谷氨酸在谷氨酸脫羧酶的作用下脫羧而成，是中樞抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，分泌GABA的神經(jīng)末梢位于下丘腦的神經(jīng)核及中隆部，而其神經(jīng)細(xì)胞則在下丘腦以外，GABA在下丘腦對黃體生成素(LH)和泌乳素(PRL)有調(diào)節(jié)作用。近年來，人們發(fā)現(xiàn)30多種外周組織中也有GABA的存在，特別是卵巢和輸卵管中含量最高，提示GABA可能對生殖系統(tǒng)有某種生理作用。GABA對哺乳類動物卵巢功能的影響，已引起生殖內(nèi)分泌領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。有資料提

2、示大鼠卵泡的生長與卵巢GABA含量有關(guān)，并且動物實(shí)驗(yàn)提示外源性GABA對黃素化顆粒細(xì)胞分泌雌二醇(estradiol，E2)和孕酮(progesterone，P)有抑制作用。本實(shí)驗(yàn)利用ELISA及RIA技術(shù)探索GABA與人卵泡發(fā)育及卵子成熟的關(guān)系和外源性GABA對人黃素化顆粒細(xì)胞分泌功能的影響。第一部分人卵泡液中GABA濃度與卵泡成熟的相關(guān)性研究【研究目的】探討在人的卵泡發(fā)育過程中GABA濃度與卵泡發(fā)育及卵子成熟的關(guān)系?！静牧虾头椒ā恐形恼?標(biāo)本來源來自2007．10"--2007．12于南方醫(yī)院生殖中心行IVF／ICSI—ET的患者44例，患者月經(jīng)周期規(guī)律，年齡均小于

3、35歲，不孕原因均為輸卵管因素不孕或男性因素不孕?；颊卟捎肎nRH長方案，陰道B超監(jiān)測卵泡發(fā)育，監(jiān)測過程中收集未成熟卵泡(<14ram)的穿刺液，無血污。當(dāng)雙側(cè)卵巢中至少有3個卵泡平均直徑≥16mm-17mm時給于HCG5000～10000IU，HCG注射后34---,36小時取卵，HCG注射日抽血查E。，取卵日留取成熟卵泡(≥16ram)的穿刺液，卵泡液無血染，1個卵泡內(nèi)含1個卵母細(xì)胞，空卵泡除外。將獲得的卵泡液離心，3000轉(zhuǎn)／分，離心5分鐘，取上清裝入EP管待測卵泡液中GABA濃度，將標(biāo)本保存在--20℃，避免反復(fù)凍融，保存時間不超過一個月。2分組A組成熟卵泡(≥1

4、6mm)液34例B組未成熟卵泡(<14mm)液lO例3統(tǒng)計學(xué)方法利用人Y一氨基丁酸ELISA試劑盒檢測卵泡液中GABA濃度，比較兩組卵泡液中GABA的濃度以探索卵泡發(fā)育過程中GABA的變化。利用SPSS11．5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較兩組濃度的差異。氏0．05差異有統(tǒng)計學(xué)意義?！窘Y(jié)果】A組與B組卵泡液中GABA的濃度分別為(29．7126±10．4225；7．0420+3．1971)ng／ml，A組濃度明顯高于B組并且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

5、1)明顯高于未成熟卵泡液中GABA濃度(7．0420±3．1971ng／m1)，兩者有顯著性差異(P

6、對照組)；10一mol／1、10～mol／1、10咱mol／1、10巧mol／1(處理組)，繼續(xù)培養(yǎng)24小時留取上清待測。2分組對照組11例10噸mol／111例10。7mol／111例lO-6mol／1ll例10巧mol／111例3統(tǒng)計學(xué)方法用人雌二醇和孕酮的放免試劑盒檢測上清液中E：和P的濃度，比較各組中激素濃度的變化。利用SPSSl1．5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，采用單向方差分析(One-wayANOVA)比較處理組與對照組之間激素水平的差異。P

7、之間有絲狀突起相互連接，細(xì)胞核大、圓，胞漿富含顆粒。2GABA對顆粒細(xì)胞分泌E：、P的影響對照組上清液中E。和P濃度分別為27．6132±6．4235pg／ml，47．8203±11．8306ng／ml，加入不同濃度的GABA后，上清液中的E：和P濃度分別為：①加入10。8mol／1GABA，上清液中E：和P濃度分別為17．7604--+4．5452pg／ml，38．8716_+6．5662ng／ml，與對照組相比，兩者差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(尸