資源描述：
《hlag基因上游調控區(qū)snp和重度子癇前期的相關性的研究 (1)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者：班掮日期：2010年5月20日學位論文使用授權聲明本人在導師指導下完成的論文及相關的職務作品，知識產權歸屬鄭州大學。根據鄭州大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權鄭州大學
2、可以將本學位論文的全部或部分編入有關數(shù)據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論文直接相關的學術論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。學位論文作者：碥鈞日期：20lO年5月20日摘要子癇前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有的嚴重并發(fā)癥，在我國發(fā)病率為9．4％，國外報道7％,--,12％。以妊娠20周后高血壓、蛋白尿和水腫為特征，并伴有全身多系統(tǒng)損害，同時常伴有胎兒生長受限。該病嚴重影響母嬰健康，是孕產婦和圍生兒發(fā)病
3、及死亡的主要原因之一。。子癇前期的病因及發(fā)病機制至今尚未完全闡明，是國內外研究的焦點。目前公認可能與以下四種學說有關：遺傳易感性、免疫適應不良、胎盤缺血、氧化應激反應。流行病學調查結果提示，遺傳易感性及免疫適應不良可能相互影響，共同參與了子癇前期的發(fā)病。圍繞這一中心思想，對引起移植排斥反應的最主要的人類白細胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)系統(tǒng)進行研究，篩選子癇前期的HLA系統(tǒng)易感基因位點，成為研究子癇前期的免疫遺傳學發(fā)病機制的一條重要思路。HLA．G表達減少的機制可能與HLA．G基因5’上游調控區(qū)(5’-
4、upstream·regulatoreregion，5’-URR)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms，SNP)相關。SNP是指存在于某一(些)群體、正常個體的基因組DNA中單個堿基的差異，是人類遺傳信息多態(tài)性的本質表現(xiàn)。其具有數(shù)目多、分布廣，相對穩(wěn)定的存在于染色體上等特點。SNP的產生可能會引起蛋白質表型的改變，所以SNP也是影響人類體質的關鍵，使人可能特別易于或特別不易患上某些疾病。本研究從SNP角度研究重度子癇前期的基因背景，推測HLA．G基因上游調控區(qū)可能存在導致重度子癇前期發(fā)病的某(幾
5、)個SNP易感位點，這些位點的堿基變化導致了HLA．G蛋白在母胎界面的表達發(fā)生變化，從而打破了母胎間的免疫耐受，導致重度子癇前期的發(fā)病。考慮到HLA—G在妊娠過程中的重要作用，及其作為一種可能誘導免疫耐受的分子在臨床中的潛在應用價值，分析其表達影響因素將有助于深入了解HLA．G的分子生物學特性，并為臨床實踐提供有價值的信息?！つ康谋狙芯渴占幽蠞h族重度子癇前期人群及正常妊娠婦女外周血，采取直接測序法計算HLA．G基因5'-URRSNP位點等位基因及基因型頻率，比較各SNPl摘要在重度子癇前期組和正常妊娠組間的分布差異。從免疫遺傳學角
6、度，分析研究HLA—G基因上游調控區(qū)SNP與重度子癇前期的關系，探討HLA—G基因上游調控區(qū)表達調控的機制。材料與方法1研究對象重度子癇前期患者39例，平均年齡(31．17+5．97)歲，平均孕周(33．93+3．53)周；病人來自2008年10月至2009年3月鄭州大學第三臨床學院產科。重度子癇前期診斷標準參照樂杰主編《婦產科學》(第7版)。選取同期孕晚期正常足月妊娠婦女43例為對照組，平均年齡(29．82a：5．07)歲，平均孕周(38．87+1．01)周。兩組孕婦孕前均無高血壓、心臟病、腎病、肝病及糖尿病史，無輸血及免疫治療病
7、史。所有研究對象均隨訪至產后12周。本研究經我院倫理委員會審批通過并獲得參與者的知情同意。2實驗方法2．1標本采集于剖宮產術前采集重度子癇前期組孕婦和正常晚孕組孕婦肘靜脈血2mL，以3．8％的枸櫞酸鈉抗凝，置．20℃冰箱保存?zhèn)溆?。采集納入者個人信息及病史資料，建立數(shù)據庫。2．2基因組DNA的提取采用鹽析法。將．20℃保存的抗凝全血在室溫狀態(tài)下逐漸溶解。取抗凝全血500p1于已滅菌的1．5m1Eppendorf管，加紅細胞裂解液(本實驗用三蒸水)900}tl，顛倒混勻，4000轉／分離心1分鐘，棄上清，重復以上步驟2．3次，直至沉淀層
8、無色。移去上清，加白細胞裂解液3701．tl(蛋白酶K終濃度為750ug／ml，SDS至終濃度為1．O％)，用振蕩器將沉淀打碎，55℃水浴30分鐘。待冷卻至室溫加100肛1飽和NaCl，充分混勻15秒，13，000轉／分離心6分鐘。將
