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《外源性神經(jīng)生長因子(ngf)對慶大霉素耳毒性閾移影響的實(shí)驗(yàn)的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中文摘要外源性神經(jīng)生長因子(NGF)對慶大霉素耳毒性閾移影響的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的：無論臨床觀察或?qū)嶒?yàn)研究均證明許多藥物和化學(xué)試劑具有耳毒性，可引起耳蝸和前庭中毒性損害，造成耳聾及前庭功能障礙。氨基糖甙類抗生素(arninoglycosideantibiotics，AmAn)損傷毛細(xì)胞的機(jī)制尚不清楚，但有以下幾種學(xué)說：(1)影響了磷酸肌醇、三磷酸肌醇、二脂酰甘油問轉(zhuǎn)化從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化；(2)抑制G蛋白和鳥氨酸脫羧酶活性；(3)氨基糖甙類抗生素能引起內(nèi)耳毛細(xì)胞的凋亡。在過去近半世紀(jì)里，國內(nèi)外學(xué)者對氨基糖甙類抗生索的耳毒性機(jī)制及其防治進(jìn)行了大量的研究工作，雖然取得
2、了一定成績，但并不盡人意。神經(jīng)營養(yǎng)因子(neurotrophicfactors，NTFs)是一類能支持神經(jīng)元生存和誘導(dǎo)神經(jīng)突起生長的化學(xué)物質(zhì)，在神經(jīng)元的發(fā)育、軸突的生長、遞質(zhì)的合成以及細(xì)胞的凋亡等階段均起著重要作用。細(xì)胞的存活、遷移、生長、分化、與其他細(xì)胞建立功能性聯(lián)系、甚至損傷后神經(jīng)元的存活及再生等均受這類物質(zhì)影響，神經(jīng)營養(yǎng)因子的失常或不足，可能是導(dǎo)致某些神經(jīng)疾患或神經(jīng)再生障礙的原因。神經(jīng)營養(yǎng)N尋：(NTFs)X具有促進(jìn)聽覺神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育并維持其正常功能的作用，其作用貫穿于從聽板形成直至Corti器毛細(xì)胞與傳入、傳出神經(jīng)末梢纖維之間建立突觸關(guān)系的全過程。而神經(jīng)生長因子(
3、nervegrowthfactor,NGF)是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中最具代表性的一員，故研究神經(jīng)生長因子對慶大霉中文摘要素耳毒性閾移的影響，有助于探討其作用機(jī)制，并為臨床治療慶大霉素引起的聽力損失提供理論依據(jù)。方法：采用昕腦干反應(yīng)及耳蝸螺旋器毛細(xì)胞掃描電鏡觀察來分析NGF對慶大霉素耳毒性閩移的影響，具體步驟如下：(1)實(shí)驗(yàn)動物及處理。選擇耳廓反射正常的健康白色雄性豚鼠30只，體重250～3009；按原始體重由小至大編號后，隨機(jī)分為生理鹽水對照組(NS組)、慶大霉素對照組(GM+NS組1及神經(jīng)生長因子實(shí)驗(yàn)組(GM+NGF組)，每組10只(20耳)。其中NS組10只豚鼠作為電鏡
4、觀察的正常對照標(biāo)本，該組實(shí)驗(yàn)豚鼠腹腔注射生理鹽水lml／kg-d，連續(xù)4周；GM+NS組：腹腔注射生理鹽水lml／kg·d，相隔15min～30min后腹腔注射慶大霉素120mg／kg·d，連續(xù)4周：GM+NGF組：腹腔注射NGF1000u／kg·d，相隔15min～30min后腹腔注射慶大霉素120mg／kg-d，連續(xù)4周。(2)聽腦干反應(yīng)(ABR)測試。實(shí)驗(yàn)開始前1天，測試豚鼠聽腦干反應(yīng)(auditorybrainstemresponse，ABR)，注射慶大霉素后開始每周測試ABR一次。聽腦干反應(yīng)測定，采用Keyponit型4通道腦干聽覺誘發(fā)電位測試儀，測定豚鼠清醒
5、狀態(tài)下的聽腦干反應(yīng)。記錄電極置于顱頂部，參考電極和接地電極分別置于同側(cè)和對側(cè)乳突部，觀測所有波形，以ⅡI波剛剛出現(xiàn)時的短聲刺激強(qiáng)度的dB值作為ABR的閾值。(3)掃描電鏡標(biāo)本制作及觀察。從3組中各選擇3只豚鼠，取其左耳耳蝸?zhàn)鳛閽呙桦婄R觀察對象。在每只豚鼠完成最后給藥及聽腦干反應(yīng)測試后(實(shí)驗(yàn)開始后4周)立即斷頭，迅速提取雙側(cè)顳骨，在解剖顯微鏡下打開聽泡，刺破圓窗膜，取出鐙骨，蝸尖鉆孔，2．5％戊二醛固定液行蝸內(nèi)灌注，10％EDTA脫鈣15天，4。C條件下在解剖顯微鏡下中文摘要用分離針剝除耳蝸骨殼，剝完后再用2．5％戊二醛液固定4h，然后用O．1mol／L磷酸緩沖液中漂洗3
6、次?每次10min，于1％鋨酸中固定2h，再經(jīng)磷酸緩沖液漂洗、乙醇梯度脫水和干燥，金屬鍍膜，再用掃描電鏡觀察耳蝸螺旋器毛細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果：(1)ABR閾值改變。受試豚鼠經(jīng)腹腔注射慶大霉素(GM)120mg／kg·d連續(xù)4周后，觀察其ABR閾值的改變，發(fā)現(xiàn)正常對照組無明顯聽力損失，GM+NS組和GM+NGF組均有聽力損失，表現(xiàn)為ABR閾值上移，其中以GM+NS組最為明顯，GM+NGF組較輕。腹腔注射慶大霉素停止后(實(shí)驗(yàn)開始后第4周)，GM+NS組豚鼠平均閾移為(67．023士2．367)dB，其中最大閾移達(dá)81．513dB。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較，腹腔注射慶大霉素全部結(jié)束后的第
7、1周、2周、3周、4周，GM+NGF組ABR閾值與GM+NS組相比，除腹腔注射慶大霉素結(jié)束后第1周外，均有非常顯著性差異(PO．05)。但GM+NS組在腹腔注射慶大霉素結(jié)束后第4周ABR閩值已達(dá)(67．023士2．367)dB。(2)耳蝸螺旋器毛細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變。正常對照組豚鼠耳蝸螺旋器內(nèi)、外毛細(xì)胞形態(tài)正常、界限清楚、排列整齊、偶有缺失。慶大霉素對照組豚鼠耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞(innerhaircells，IHC)及3排外毛細(xì)胞(Outer
