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《靜電紡聚合物超細纖維作為基因控釋體系的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第1頁摘要電紡纖維技術(shù)作為一種新型的材料加工方法，可以得到直徑在納米到微米級的超細纖維膜。纖維膜具有較高的孔隙率、極大的比表面積、良好的結(jié)構(gòu)仿生性，有利于細胞的粘附和藥物的攜載和釋放。本論文旨在構(gòu)建一種新型攜載基因的聚合物超細纖維制劑，系統(tǒng)研究基因的攜載和釋放，電紡和釋放過程中基因的結(jié)構(gòu)完整性和轉(zhuǎn)染活性的保持等。本文首先是模型基因的提取和純化。通過CaCl2法制備E．coliDH5a的感受細胞，將pECFP．N2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受細胞，構(gòu)建了含pECFP．N2質(zhì)粒的E．coliDH5a轉(zhuǎn)化子。經(jīng)大量培養(yǎng)擴增后，利
2、用試劑盒提取純化pECFP．N2質(zhì)粒。經(jīng)過紫外光譜、凝膠電泳檢測，得到的質(zhì)粒與原質(zhì)粒結(jié)構(gòu)相符、純度較高。采用乳液電紡的方法，成功地將質(zhì)粒DNA載到聚乳酸．聚乙二醇共聚物(PELA)中，得到DNA／PELA纖維。纖維形貌規(guī)整，直徑為450±140nnl，激光共聚焦掃描電鏡觀察表明熒光標(biāo)記質(zhì)粒包裹于纖維內(nèi)部，形成了明顯的核殼結(jié)構(gòu)。質(zhì)粒的實際包裹效率達到了92．7％，從纖維中萃取的質(zhì)粒經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測表明結(jié)構(gòu)完整，細胞轉(zhuǎn)染實驗表明質(zhì)粒活性良好，表明電紡過程較好地保護了質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和活性。體外釋放顯示出一個緩慢、穩(wěn)定的釋放特性，在12h僅釋放
3、了29．1％，維持了將近35天的緩慢釋放，表明了核殼結(jié)構(gòu)的纖維在減少突釋、保持持續(xù)釋放等方面的作用。電泳檢測結(jié)果表明核殼纖維在釋放過程中保持了完整的結(jié)構(gòu)，細胞轉(zhuǎn)染實驗證明了保持了較好的轉(zhuǎn)染效率，這進一步證明了核殼結(jié)構(gòu)纖維對質(zhì)粒的保護作用。在乳液電紡中，分別在油相和水相中引入聚乙烯亞胺(PEI)，制備了D蝴ELA．PEI和DNA-PEI／PELA核殼結(jié)構(gòu)纖維。體外釋放結(jié)果表明，DNA／PELA．PEI和DNA／PELA纖維的釋放行為相近，都能很好地控制DNA的釋放。但DNA．PEI／PELA除了早期的突釋外，DNA．PEI復(fù)合粒f難于釋放
4、出來。西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第1I頁在細胞的粘附和增殖試驗中，DNA／PELA．PEI纖維中PEI的加入一定程度上改變了纖維的親水性，但是隨著其含量的增加也加大了對細胞的毒性。而DNA-PEI／PELA纖維中，復(fù)合粒子的突釋導(dǎo)致培養(yǎng)初期對細胞的毒性。在纖維支架上的細胞轉(zhuǎn)染實驗結(jié)果表明，在纖維核層或殼層中引入PEI有助于質(zhì)粒對細胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率與加入的PEI量有關(guān)。本文利用乳液電紡成功將質(zhì)粒載到核殼結(jié)構(gòu)的超細纖維中，在電紡和釋放過程中較好地保持了基因的結(jié)構(gòu)完整性和轉(zhuǎn)染活性。本研究不但對藥物控釋體系和組織工程的研究有一定的借鑒意義
5、，也為基因治療提供了新的思路。關(guān)鍵詞：質(zhì)粒；靜電紡絲；藥物釋放；核殼結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)完整性；轉(zhuǎn)染活性西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第1Il頁AbstractElectrospinningtechnologyasanoveltypeofmaterialsprocessingmethod，hasmanyexcellences，suchasrelativeeaseofuse，adaptability，andtheabilitytofabricatefiberswithdiametersonthenanometertomicrometerscale．
6、Furthermore，theelectrospinningprocessaffordstheopportunitytoengineerscaffoldswithmicrotonanoscaletopographyandhighporositysimilartothenaturalextracellularmatrix．Theinherentlyhighsurfacetovolumeratioofelectrospunscaffoldscanenhancecellattachmentanddrugloading．Inthecurrent
7、study，elcctrospunultrafinefiberswereinvestigatedascarriersofplasmidDNA,andtheloadingefficiencyandsustainedreleasebehaviors，thestructuralintergrityandtransfectionefficacyofentrappedDNAwereexaminedindetail．ThecompetentEscherichiacolibacteriacellswereobtainedbyCaCl2method．p
8、EGFP-N2(4737bp)encodinggreenfluorescentprotein(GFP)Wasamplifiedinatransformantofcompetentbacteriaandiso
