銀蓮花素a誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細胞凋亡的分子機理的研究

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1、西南交通大學碩士研究生學位論文第l頁摘要目的：研究銀蓮花素A在體外對人結(jié)腸癌細胞的增殖抑制作用，并探討其誘導(dǎo)細胞7凋亡的分子機制。方法：用MTr測定人結(jié)腸癌細胞SW480、HCTll6和LOVO在不同藥物濃度梯度的銀蓮花素A處理48h后細胞活性，并以O(shè)．1％DMSO作為陰性對照計算銀蓮花素A對細胞生長的抑制率與半數(shù)抑制濃度IC50；然后，用不同濃度梯度的銀蓮花素A分別處理人結(jié)腸癌細胞LOV01d、3d、5d后，繪制出LOVO細胞的生長曲線；采用PI染色法流式細胞儀檢測分析不同濃度(3個濃度梯度)銀蓮花素A處理人結(jié)腸癌細胞LOVO(24h)后細胞周期時相分布情況；利用倒置

2、顯微鏡觀察銀蓮花素A誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細胞LOVO凋亡的形態(tài)變化并DAPI染色后觀察其細胞凋亡的細胞核染色質(zhì)變化情況；運用分光光度法測定銀蓮花素A處理人結(jié)腸癌細胞LOVO(24h)后caSpaSe．3活性的改變：采用赳PA裂解法提取藥物處理后LOVO細胞的總蛋白經(jīng)wreStemblot法檢測PAI沖、Bim、P．44／42、P．ⅢK、XIAP、sun，ivin、Bcl．2、Bcl．xl和P．STAT3的活性改變和線粒體與胞漿細胞色素C的表達情況；將載有survivin基因的質(zhì)粒DNA進行瞬時轉(zhuǎn)染到LovO細胞中，經(jīng)MTT檢測細胞活性：在培養(yǎng)基中加入一定濃度的P．ⅢK的抑制劑S

3、Pl0065與銀蓮花素A后，通過MTT法測定人結(jié)腸癌細胞LOV0的活性。結(jié)果：銀蓮花素A明顯的抑制了人結(jié)腸癌細胞SW480、HCTll6和LOVO增殖，48h半數(shù)抑制濃度IC50分別為1．783州(SW480)、1．338肛M(HCTll6)、O．156州(LOVO)(P<0．05)，而且在14．00pM濃度均已經(jīng)達到約90％的抑制率(P

4、的比例增加明顯；與對照組相比，銀蓮花素A作用于人結(jié)腸癌細胞LOVO明顯激活PAI沖、caLspaSe．3、P．44／42、P．JNK、的活性，上調(diào)Bim、下調(diào)XIAP、surVivin、Bcl．2、Bcl．xl和P．SW盯3的表達，在胞漿中細胞色素C的表達高于線粒體中，而且差異顯著；用MTT檢測，經(jīng)轉(zhuǎn)染有suⅣivm基因的LOVO細胞的活性明顯高于對照組；加入P．烈K抑制劑SPl0065后明顯抑制了銀蓮花素A對人結(jié)腸癌細胞LOVO的凋亡。結(jié)論：銀蓮花素A能有效抑制人結(jié)腸癌細胞生長并誘導(dǎo)其凋亡，其可能是通過使腫瘤細胞阻滯在G0／Gl期，并通過激活線粒體途徑和心K通路從而引

5、起結(jié)腸癌細胞的凋亡。西南交通大學碩士研究生學位論文第lI頁關(guān)鍵詞銀蓮花素A；人結(jié)腸癌細胞；細胞凋亡；西南交通大學碩士研究生學位論文第1lI頁Abstractobjective：To咖dyIhddeaninAonh啪aIlcoloncallcerceUproliferationinVi仃0，aIldtoexploreitsmolecularmechanismofinducedingapoptosis．Methods：Evaluationofcenviabil時inducedbyRaddeallinAofthedi臟rentdrugconcemration仃eatment(

6、48h)t0h髓a11coloncallcercenSW480、HCT116鋤dLOVObyMTTand0．1％DMSO硒anegatiVecorltrolcalculationraddea血nA0ncellgrowthinhibitionrateHalfi出bito巧conce刪ionIC50；111entodⅢVLOV0ceUgromhcun，eaRerhumancoloncancercellsLOVOwere勺reatedwithadiff-erentconcentrationgradientraddeallinAin1d，3d，5d；Thecencyclepha

7、sedistributionbyflowcytomet呵aIldPIstainingaRerRaddeallinAofthedi付．erentdmgconcentration(threeconcen仃ationgradient)仃eatment(24h)tohumaJlcoloncallcercellLOVO；T11emo印hologicalchaJlgesof印optosisinducedbyIⅧde撕nAtreannenttoh啪ancoloncancercellLOVOaIldapoptosisobSeⅣedchaIlgesiIl姍