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1、中科瑞泰（北京）生物科技有限公司Tel:400-699-0631http://www.real-tims.com.cnE-mail:real-times@163.com堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號(hào):RTD6131）Ver.680564BasicProteinNativePAGEGelPreparationandElectrophoresisKit●產(chǎn)品組成：貨號(hào)名稱規(guī)格保存條件AC2913-0130%PAA(29:1)100ml4℃，避光RTD6131-024×堿性蛋白分離膠緩沖液pH4.3100ml4℃RTD6131-034×堿性蛋白濃縮膠緩沖液pH6.830
2、ml4℃AP020PAPS（干粉）0.5gRTTA0761-01TEMED0.5ml4℃，避光PL1105×甲基綠上樣緩沖液1ml-20℃TG160P5×堿性蛋白電泳緩沖液（干粉）1LRT●產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本公司提供的試劑盒包含堿性蛋白凝膠制備及電泳所需的全部試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒可用于配制堿性蛋白非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制30-50塊常規(guī)大小的非變性PAGE膠。各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不同，因而有各自的等電點(diǎn)。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)稱為堿性蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)偏堿性，如組蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量較多
3、的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)就偏酸性。分離堿性蛋白時(shí)候，要利用低pH凝膠系統(tǒng)，分離酸性蛋白時(shí)候，要利用高pH凝膠系統(tǒng)。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的pH是8.8的緩沖系統(tǒng)，蛋白會(huì)帶負(fù)電荷，蛋白會(huì)相陽極移動(dòng)；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進(jìn)行，蛋白帶正電荷，這時(shí)候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。特別說明：由于本系統(tǒng)采用非連續(xù)凝膠系統(tǒng)，分離膠pH為4.3，因此要求待分離的蛋白等電點(diǎn)pI＞7.0，這樣堿性蛋白在酸性凝膠系統(tǒng)內(nèi)帶正電荷，在凝膠電泳中才能正常向陰極泳動(dòng)。如果待分離的蛋白等電點(diǎn)pI＜7.0，請(qǐng)選擇非連續(xù)Laemmli活性凝膠系統(tǒng)分離（貨號(hào)：RTD6130）?！袷褂谜f明：一配制分離
4、膠（各試劑使用量請(qǐng)參考表二）根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度（表一），再按照下面的分離膠配方表（表二）配制非變性PAGE的分離膠(即下層膠)。表一不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍：SDS-PAGE分離膠濃度最佳分離范圍6%50-150kD8%30-90kD10%20-80kD12%12-60kD15%10-40kD注：本制品僅供科研用。請(qǐng)勿用于人體及動(dòng)物的醫(yī)療、臨床診斷或作為食品、化妝品、家庭用品的添加劑等用途。1中科瑞泰(北京)生物科技有限公司電話:400-699-0631E-mail:real-times@vip.163.comhttp://www.re
5、al-times.com.cn配制分離膠前，根據(jù)以下配方準(zhǔn)備10%APS：10%APS配制-5ml：將0.5gAPS干粉溶于5ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1ml/支，-20℃?zhèn)浯?，每次取一管使用?0%APS應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10%APS。制備分離膠步驟：1．參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。2．根據(jù)表二，將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；先后加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡3．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-g
6、el，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5cm或距梳齒約0.5cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5cm的水層，使凝膠表面保持平整。4．靜置40-80分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說明凝膠已聚合。注：由于分離膠的pH為酸性4.3，凝膠時(shí)間較Laemmli系統(tǒng)（pH8.8）要長(zhǎng)，可以37℃加速凝膠。凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。可以根據(jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。配制不同體積的8%分離膠所需各組分的體積(毫升)各組份體積總體積51015203050組份滅菌水2.44.77.19.514.223.74×
7、分離膠緩沖液pH4.31.252.53.7557.512.530％PAA（29:1）1.32.745.3813.310％APS0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0050.010.0150.020.030.05配制不同體積的10%分離膠所需各組分的體積(毫升)各組份體積總體積51015203050組份滅菌水24.16.18.112.220.34×分離膠緩沖液pH4.31.252.53.7557.512.530％PAA（29:1）1.73.356.71
