殼聚糖賴氨酸綴合物的制備及其凝血性能研究

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1、摘要本文采用賴氨酸修飾殼聚糖來改進(jìn)其凝血性能,有望制得具有實(shí)用價(jià)值的止血材料。主要內(nèi)容包括以下部分:一、采用碳二亞胺偶聯(lián)法在不同脫乙酰度殼聚糖分子鏈上綴合不同取代度的賴氨酸,以紅外光譜(FTIR)和元素分析測試法對殼聚糖一賴氨酸綴合物進(jìn)行表征,結(jié)果表明賴氨酸已綴合到殼聚糖分子鏈上,且其引入量隨著加入量的增加而提高。通過研究分析各組材料與血液有形成分(主要是紅細(xì)胞和血小板)及凝血因子的相互作用,初步評價(jià)了殼聚糖在修飾前后凝血性能的變化。通過光密度測試和血細(xì)胞計(jì)數(shù),考察了各組材料對紅細(xì)胞和血小板的聚集特性。殼聚糖能明顯誘發(fā)紅

2、細(xì)胞聚集,這種凝聚作用隨著脫乙酰度的增大明顯增強(qiáng),且此聚集效果隨材料用量的加大而提高。賴氨酸的引入對材料和紅細(xì)胞間相互作用的貢獻(xiàn)并不明顯。殼聚糖能在短時(shí)間內(nèi)激活血小板,使其失去碟狀形態(tài)而成球形。隨著殼聚糖脫乙酰度增加,其對血小板的粘附和聚集作用顯著增加。引入賴氨酸后,血小板聚集率和粘附數(shù)量均提高較大,且影響程度和賴氨酸的引入量有關(guān)。殼聚糖衍生物/血小板復(fù)合物可加速血纖維蛋白膠的生成,且影響效果與衍生物對血小板的粘附聚集作用一致。部分活化凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)和凝血酶時(shí)間(TT)的測定結(jié)果表明殼聚糖

3、不能直接作用于凝血因子,綴合賴氨酸后亦不能和凝血因子直接作用。‘二、比較了殼聚糖~賴氨酸綴合物、殼聚糖一鳥氨酸綴合物及膠原的凝血性能,對照結(jié)果表明,殼聚糖一賴氨酸綴合物對血小板的聚集能力與膠原接近,且其與血小板之間并不僅是簡單的靜電相互作用,而可能和血小板膜表面物質(zhì)存在某種特異性結(jié)合(特別是膠原受體GPIa—IIa,GPIV)間存在特異結(jié)合,因?yàn)槠湟l(fā)的血小板聚集率明顯高于分子結(jié)構(gòu)相似的殼聚糖及其與鳥氨酸的綴合物。三、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,殼聚糖一賴氨酸綴合物細(xì)胞毒性較低。關(guān)鍵詞:殼聚糖,賴氨酸,紅細(xì)胞,血小板,凝血因子

4、ABSTRACTInthiswork,aprospectivehemostaticmaterialWaSpreparedviamodifyingchitosanwithlysine.ThemaincontentsofthethesisincludetwopartsaSfollows:1.Chitosan-lysineconjugateWaSpreparedbymodifyingchitosanofdifferentdeacetylationdegreewithlysineusing1-ethyl·3(3一dimethyl

5、aminopropyl)carbodiimideandN-hydroxysuccinimideaScouplingsystem,andtheproductsWaScharacterizedbyFTIKandElementAnalysis.CoagulantpotentialofthepreparedproductsandchitosanWaSreviewedthoughttheirinteractionwithbloodcontents,such弱erythroeytes,plateletsandcoagulationf

6、actors.Redbloodcell/materialsinteractionWaSmonitoredthroughchangesinopticaldensity,andredbloodcells’numberwascalculatedbeforeandaftertheexperiment,andplatelet/materialsinteractionWaSevaluatedinthesameway.Chitosancallapparentlytriggertheaggregationof·豇ythrocytes,a

7、ndtheeffectwasdose-dependentandinlinewithitsdeacetylationdegreeaswellandhaslittletodowithlysine.TheresultindicatedthatplateletWasactivatedassoon硒itWaSexposedtochitosanmembrane,accompaniedwithchangeinmorphology.PlateletsadheredstronglyOnthesurfaceofchitosan-lysine

8、membraneandwereboundtoeachothertoformaggregatedmass.Thedatainfibrinclot-formationtimesshowedthatclaitosan-lysine/plateletmixturegallacceleratetheprocessoffibri

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