海南尖峰嶺草藥葉下珠沒(méi)食子酸提取工藝探究

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1、海南尖峰嶺草藥葉下珠沒(méi)食子酸提取工藝探究摘要：本研究將采自海南尖峰嶺的葉下珠，通過(guò)離子化萃取分離法提取了其中的沒(méi)食子酸。我們?cè)陬A(yù)實(shí)驗(yàn)中摸索了沒(méi)食子酸的提取溶劑和提取方法。采用正交試驗(yàn)的方法，優(yōu)化了影響沒(méi)食子酸提取效率的三要素：浸泡時(shí)間，提取次數(shù)和浸提時(shí)間。試驗(yàn)結(jié)果表明提取沒(méi)食子酸的最佳工藝條件是：浸泡1.5小時(shí)，抽提3次，浸提時(shí)間為2小時(shí)，在此條件下沒(méi)食子酸的提取率最高達(dá)0.351%o關(guān)鍵詞：提取葉下珠沒(méi)食子酸中圖分類號(hào)：G642.0文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI:10.3969/j.issn.1672-8181.2014

2、.01.040葉下珠，別名珍珠草、珠子草等，為大戟科植物葉下珠(EuphorbiceaceurinariaL)的干燥全草。有關(guān)葉下珠的藥用價(jià)值始載于清朝，可治療小兒疳眼，疳積等，現(xiàn)在認(rèn)為葉下珠甘涼，入肝肺二經(jīng)，平肝清熱，利水解毒［1］。通過(guò)對(duì)葉下珠的化學(xué)成分和藥理作用的研究表明，葉下珠中的沒(méi)食子酸具有抗乙肝病毒(HBV)、保肝護(hù)肝的作用［1-2］,且其含量較高，是葉下珠的主要有效成分，這一點(diǎn)引起了國(guó)內(nèi)外很大的關(guān)注。然而，近年來(lái)的研究多聚焦在沒(méi)食子酸藥效上，少關(guān)注提取工藝改良，這不利于葉下珠產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,本研究對(duì)

3、沒(méi)食子酸的提取工藝進(jìn)行了多次探索和優(yōu)化，為進(jìn)一步高效開(kāi)發(fā)利用沒(méi)食子酸提供了一些理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料及設(shè)備原料及藥品：葉下珠藥材（采自海南尖峰嶺及?？谥苓?取之干燥后過(guò)60目篩）；95%乙醇為分析純；磷酸為分析純;甲醇為色譜純，蒸館水為實(shí)驗(yàn)室自制；沒(méi)食子酸對(duì)照品（購(gòu)自SIGMA公司）。儀器：METTLER-TOLEDO電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；Poly-science數(shù)顯恒溫水浴鍋（單孔,美國(guó)）；高效液相色譜儀（日本島津制作所）；HP-01真空抽濾機(jī)；101-1型干燥箱（中國(guó)上海市

4、實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；Haier電冰箱（青島海爾股份發(fā)有限公司）；Theromsceentific超純水機(jī)（美國(guó)）；FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；109號(hào)藥典檢驗(yàn)篩（浙江省上虞縣紗篩廠制造）。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1工藝流程工藝流程大致分為以下步驟：葉下珠藥材的精選、粉碎過(guò)篩、回流提取、過(guò)濾、試品溶液備用。1.2.2提取溶劑的選擇沒(méi)食子酸屬有機(jī)酸及多酚類物質(zhì)，在熱水、甲醇、乙醇或乙瞇中溶解［3］。經(jīng)過(guò)多種溶劑提取葉下珠的沒(méi)食子酸的預(yù)實(shí)驗(yàn)后，本實(shí)驗(yàn)選擇環(huán)保材料水作為提取溶劑。1.2.3提取方法

5、的選擇在提取方法的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，我們探索了冷浸法、熱回流提取法、超聲處理法［3］提取葉下珠的沒(méi)食子酸，綜合考慮各方面因素后，本實(shí)驗(yàn)選擇冷浸法和熱回流提取法。1.2.4對(duì)照品溶液的制備取適量沒(méi)食子酸對(duì)照品，用萬(wàn)分之一天平稱量，然后加50%甲醇制成25/mL沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液。1.2.5供試品溶液的制備取供試品（過(guò)60目篩）約4幻精密稱量，置于250mL三角瓶中，加水60mL,連接回流冷凝管，加熱至沸騰后保持沸騰1小時(shí)。冷卻后，取下三角瓶，對(duì)供試品進(jìn)行初步過(guò)濾,取濾液lmL置于10mL容量瓶中，用50%甲醇定容至10mL

6、刻度,用孔徑為0.45的微孔濾膜過(guò)濾。1.2.6沒(méi)食子酸含量的測(cè)定本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定葉下珠中沒(méi)食子酸的含量［4］,填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸溶液（體積比5：95）；流速為0.9ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm；進(jìn)樣為10L；柱溫為室溫［5］,理論板數(shù)按沒(méi)食子酸計(jì)算應(yīng)不低于2000o按照沒(méi)食子酸吸收峰的峰面積計(jì)算供試品中沒(méi)食子酸的含量。2結(jié)果與分析2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，浸泡時(shí)間，提取次數(shù)，提取時(shí)間對(duì)沒(méi)食子酸的得率有較為顯著的影響，我們最終對(duì)這3個(gè)因素作在3個(gè)水平(見(jiàn)表1)

7、上進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，測(cè)定不同工藝條件下提取液中沒(méi)食子酸的含量，結(jié)果表2,表3,圖1,圖2：表1正交實(shí)驗(yàn)因素水平表2正交試驗(yàn)的安排及結(jié)果表3方差分析圖1沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品圖圖2沒(méi)食子酸樣品圖2.2結(jié)果分析通過(guò)對(duì)表2、表3的結(jié)果分析，各因素對(duì)提取效果的影響程度分另為A>B>C,其中影響最大的是提取次數(shù)，而提取2h后就沒(méi)有什么變化了。從各因素的參數(shù)估計(jì)看來(lái)，為保證沒(méi)食子酸完全被提取出來(lái)，選擇最佳因素水平組合為A3B2Clo3討論據(jù)流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告，我國(guó)至少有8億人感染過(guò)乙型肝炎，而我國(guó)人群中的乙肝表面抗原的攜帶率高

8、達(dá)10%左右，即在我國(guó)約有1.3億人為乙肝病毒攜帶者，他們中的四分之一最終將發(fā)展成慢性肝炎、肝硬化或原發(fā)性肝癌。所以，在我國(guó)研究開(kāi)發(fā)防治乙型肝炎的藥物迫在眉睫。直到目前，研究者對(duì)約200種中藥材進(jìn)行防治乙肝的體外、體內(nèi)研究，只發(fā)現(xiàn)了葉下珠（珍珠草）和五倍子對(duì)乙肝表面抗原有效［5-6］?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明葉下珠具有極強(qiáng)的抗乙肝病毒和保肝作用，化學(xué)藥理研究及初步臨床觀察，也表明