復(fù)方地黃對pd大鼠多巴胺能神經(jīng)元及gdnf表達(dá)的影響

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1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文復(fù)方地黃對PD大鼠多巴胺能神經(jīng)元及GDNF表達(dá)的影響姓名：胡喬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張雄2012-05-23溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文復(fù)方地黃對PD大鼠多巴胺能神經(jīng)元及GDNF表達(dá)的影響中文摘要目的：本研究擬采用6．羥基多巴胺(6．hydroxydopamine，6-OHDA)誘導(dǎo)建立帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)大鼠模型，探討復(fù)方地黃對PD大鼠多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用及其可能機制。方法：1、動物實驗。40只SD雄性大鼠隨機分為A、B、C、D四組。A組為正常對照，B、C、D組所有大鼠接受單側(cè)立體定向微量注射，注射位置均為

2、右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束(Middleforebrainbundle，MFB)，B組僅注射含0．02％抗壞血酸的生理鹽水作為假手術(shù)組，C組為注射6．OHDA模型組、D組為模型組+復(fù)方地黃組(即干預(yù)組)。干預(yù)組于造模后每鼠灌胃復(fù)方地黃混懸液2ml，正常對照組、假手術(shù)組、模型組于術(shù)后每鼠灌胃生理鹽水2ml，1次／天，共14天。2、觀察PD大鼠的神經(jīng)行為學(xué)。于造模后第4周末，以耳后皮下注射阿樸嗎啡(apomorphine，APO)誘發(fā)大鼠向一側(cè)旋轉(zhuǎn)，記錄開始旋轉(zhuǎn)至30min內(nèi)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)。3、免疫組化分析。腦組織塊經(jīng)黑質(zhì)區(qū)及紋狀體區(qū)全段冠狀切片，免疫組化方法檢測黑質(zhì)致密部(substantianig

3、racompacta，SNc)酪氨酸羥化酶(tyrosinehydroxylase，TH)gfl性神經(jīng)元，并按序列計數(shù)TH染色陽性細(xì)胞作為多巴胺能神經(jīng)元定量計算依據(jù)。分別取黑質(zhì)區(qū)及紋狀體區(qū)切片作膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子fglialcellline．derivedneurotrophicfactor，GDNF)染色，通過對切片進(jìn)行圖像分析，記錄單位面積染色陽性細(xì)胞個數(shù)。結(jié)果：1、APO誘導(dǎo)的行為學(xué)結(jié)果。于造模后第4周末，以耳后皮下注射APO誘發(fā)大鼠向一側(cè)旋轉(zhuǎn)，記錄開始旋轉(zhuǎn)至30min內(nèi)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)；干預(yù)組(223．3±18．8次／30min)與模型組(254．6±14．3次／30min

4、)比較，旋轉(zhuǎn)圈數(shù)明顯減少釁0．05o提示復(fù)方地黃方能夠改善PD大鼠藥物誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為異常。2、中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變化。利用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測黑質(zhì)TH表達(dá)，反映多巴胺能神經(jīng)元。正常組及假手術(shù)組黑質(zhì)可見大量排列整齊的免疫陽性神經(jīng)元，胞體大，呈梭形，兩組(右側(cè))相比差異無統(tǒng)計意義(P>0．05)；溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文模型組(損毀側(cè))黑質(zhì)的免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元(52．9-1-2．2)較正常組(160．3±2．4)及假手術(shù)組(161．6±3．4)均明顯減少畔O．05)；干預(yù)組(損毀側(cè))黑質(zhì)的免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元(61．5±2．6)較模型組(損毀側(cè))明顯增多(P

5、未損毀側(cè)比較無統(tǒng)計學(xué)意義(尸>0．05)；提示復(fù)方地黃干預(yù)組有神經(jīng)保護(hù)作用。3、復(fù)方地黃對PD模型大鼠損毀側(cè)黑質(zhì)和紋狀體區(qū)GDNF表達(dá)的影響。GDNF免疫組織化學(xué)染色顯示，正常組和假手術(shù)組黑質(zhì)及紋狀體區(qū)GDNF免疫陽性細(xì)胞分布集中，細(xì)胞數(shù)目少；在黑質(zhì)區(qū)，模型組大鼠黑質(zhì)區(qū)GDNF表達(dá)(6．51±2．15)較正常組(13．18±3．21)及假手術(shù)組(14．24±3．92)均明顯減少(P<0．05)；而在紋狀體區(qū)，模型組大鼠紋狀體區(qū)GDNF表達(dá)(21．16±2．58)較正常組(20．24±2．82)及假手術(shù)組(19．75-t-2．21)均稍有增強，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O．05)；干預(yù)組黑

6、質(zhì)(17．53±2．08)和紋狀體區(qū)(26．18±4．06)GDNF表達(dá)與其它組比較均明顯增強(PO．05)。說明復(fù)方地黃干預(yù)使PD大鼠黑質(zhì)和紋狀體區(qū)GDNF表達(dá)增強。結(jié)論：1、復(fù)方地黃能明顯改善PD大鼠藥物誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為異常，部分拮抗6．羥基多巴胺誘導(dǎo)的PD大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的丟失；2、復(fù)方地黃對PD大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用可能與其促進(jìn)內(nèi)源性GDNF分泌增加有關(guān)。關(guān)鍵詞復(fù)方地黃；帕金森病；酪氨酸羥化酶；膠

7、質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子；大鼠6溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文EffectsofcompoundrehmanniaondopaminergicneuronsandtheexpressionofGDNFinParkinsonianratsABSTRACTobjectiveToinvestigatetheneuroprotectiveeffectsofcompoundrehmanniaondopaminergicneuronsofParkinsonianratmodelinduce