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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文硼替佐米對K562細(xì)胞株的PTPROt基因的影響姓名：范麗霞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：羅建民201203中文摘要硼替佐米對K562細(xì)胞株的PTPROt基因的影響摘要目的：慢性粒細(xì)胞白血病(Chronicmyelogenousleukemia，CML)是骨髓增生性惡性疾病，起源于造血干細(xì)胞水平，骨髓內(nèi)髓系細(xì)胞異常增生，取代正常的骨髓組織。為最常見的骨髓增殖性疾病。95％以上慢性粒細(xì)胞白血病均有9號染色體原癌基因ABL和22號染色BCR的斷裂點(diǎn)簇集區(qū)重組，即t(9；22)(q34：11)，形成BCR／ABL融合基因，導(dǎo)致酪氨酸
2、激酶活性增加，從而導(dǎo)致了慢性粒細(xì)胞白血病的發(fā)病，目前酪氨酸酶抑制劑伊馬替尼(格列衛(wèi))的治療是治療慢性粒細(xì)胞白血病的首選藥物，在其慢性期患者取得令人鼓舞的療效，使大多數(shù)處于慢性期的病人獲得了細(xì)胞遺傳學(xué)緩解Ⅲ。但是應(yīng)用伊馬替尼治療慢性粒細(xì)胞存在目前尚無法解決的兩方面問題。首先，因?yàn)橐榴R替尼為白血病基因產(chǎn)物的抑制劑，不能根除致病基因，患者需要終身服藥，停藥導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)。其次是在應(yīng)用伊馬替尼治療的病人的耐藥問題，殘留的致病基因及BCRJABL融合基因出現(xiàn)點(diǎn)突變是引起伊馬替尼對慢性粒細(xì)胞白血病耐藥的原因之一，【羽當(dāng)然除此之外BCPUABL基因的擴(kuò)增，BCPUABL染色體
3、以外合并其他染色體突變等等都是造成伊馬替尼療效不佳或是耐藥的原因。應(yīng)運(yùn)而生的新的酪氨酸激酶抑制劑現(xiàn)在已開始應(yīng)用，現(xiàn)被應(yīng)用于臨床的有達(dá)沙替尼及尼羅替尼等，部分病人取得了很好的臨床療效。但新的酪氨酸激酶抑制劑仍存在著僅僅對致病基因有抑制作用，而無法根除致病基因的問題。且目前任何所有酪氨酸激酶抑制劑對T3151BCR／ABL融合基因突變無效果，‘31故現(xiàn)在正在實(shí)驗(yàn)室或是早期臨床試驗(yàn)正在對慢性粒細(xì)胞白血病治療進(jìn)行多方面研究，硼替佐米是第一個(gè)被應(yīng)用于臨床的蛋白酶體，現(xiàn)被美國FDA批準(zhǔn)在復(fù)發(fā)難治的多發(fā)性骨髓瘤及套細(xì)胞淋巴瘤上，且很多研究表明硼替佐米不僅僅對多發(fā)性骨髓瘤及淋
4、巴瘤有療效，在眾多體外實(shí)驗(yàn)中表明對很多惡性腫瘤，包括實(shí)體瘤及血液系統(tǒng)惡性疾病均有一定的抑制作用。目前關(guān)于其起作用的機(jī)制還未完全清楚，PTPROt基因是潛在的腫瘤候選基因，本課題前期研究已經(jīng)證實(shí)慢性粒細(xì)胞白血病患者的PTPROtmRNA表達(dá)水平下降，加速急變期較慢性期表達(dá)水平低，且經(jīng)5．雜氮胞苷作用后的CML病人PTPROtmRNA中文摘要重新表達(dá)。CML的發(fā)病與PTPROt基因低表達(dá)有關(guān)，為了解硼替佐米的作用機(jī)制是否與上調(diào)PTPROt基因的表達(dá)有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)選用硼替佐米和阿糖胞昔單藥聯(lián)合共同用藥，同時(shí)改變兩藥應(yīng)用序次，觀察其對K562細(xì)胞株的抑制作用和凋亡，并觀
5、察用藥前后PTPROt基因表達(dá)情況。為硼替佐米單藥或是聯(lián)合用藥應(yīng)用于治療慢性粒細(xì)胞白血病提供理論基礎(chǔ)。方法：本研究對象為CML細(xì)胞株的K562細(xì)胞株。將K562細(xì)胞分為6組。分別為1．阿糖胞苷處理6小時(shí)后序貫給予硼替佐米非干預(yù)組2．硼替佐米處理6小時(shí)后序貫給予阿糖胞苷組3．同時(shí)給予硼替佐米和阿糖胞苷4鄺可糖胞苷處理組5．硼替佐米處理組6．對照組。用藥48小時(shí)，應(yīng)用MTT法檢查各組細(xì)胞增殖抑制率，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測PTPRO基因表達(dá)量的變化。·結(jié)果：1MTT結(jié)果顯示：單藥和聯(lián)合用藥均可抑制K562細(xì)胞的增殖率。聯(lián)合用藥好于
6、單獨(dú)作用，其中先用阿糖胞苷處理后再給予硼替佐米組抑制作用最強(qiáng)，其次為同時(shí)處理組，再其次為先給予硼替佐米后再給予硼替佐米組。2流式細(xì)胞儀結(jié)果：單藥和聯(lián)合用藥可以使凋亡率增加，聯(lián)合用藥作用強(qiáng)于單藥應(yīng)用。其中先阿糖胞苷處理后再給予硼替佐米組作用最強(qiáng)。其次為先用阿糖胞苷后再給予硼替佐米組，再其次為先給予硼替佐米后給予阿糖胞苷組。3PCR結(jié)果顯示：單藥硼替佐米和聯(lián)合阿糖胞苷均可以使PTPROt基因表達(dá)量上調(diào)，阿糖胞苷單藥應(yīng)用不能使PTPR0t基因表達(dá)量上調(diào)。結(jié)論：硼替佐米和阿糖胞苷均可以抑制K562細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，聯(lián)合用藥優(yōu)于單藥應(yīng)用，其中以先阿糖胞苷處理后應(yīng)用
7、硼替佐米組作用最強(qiáng)。關(guān)鍵詞：硼替佐米；PTPROt基因；阿糖胞苷；K562細(xì)胞；慢性粒細(xì)胞白血病英文摘要TheimpactofbortezomibonPTPROtgeneinK562cellsABSTRACTObjective：Chronicmyelogenousleukemia(CML)isamyeloproliferativemalignantdiseaseoriginatedinthehematopoieticstemcelllevel．a(chǎn)ndtheabnormalproliferationofmyeloidstemcellswithinthebonem
8、arrowreplacethenorm
