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1、分類號(hào)S852.62學(xué)校代碼10129UDC11.220學(xué)號(hào)2010201075綿羊肺炎支原體的分離鑒定及全基因組序列的測定和分析IsolationIdentificationofMycoplasmaovipneumoniaeandGenomicSequenceDeterminationandAnalysis申請(qǐng)人：郝瑞霞學(xué)科門類：農(nóng)學(xué)學(xué)科專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)指導(dǎo)教師：郝永清教授論文提交日期：二〇一二年五月摘要綿羊肺炎支原體(Mycoplasmaovipneumoniae，MO)可以引起綿
2、羊和山羊的增生性、間質(zhì)性胸膜肺炎。在全世界有蔓延的趨勢，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的損失，所以對(duì)羊支原體病的研究日益受到人們的重視，本試驗(yàn)從病原的分離鑒定、診斷方法和藥物防治等方面對(duì)MO進(jìn)行了研究，為生產(chǎn)上防治該病提供了依據(jù)。1、通過對(duì)內(nèi)蒙古四子王旗和達(dá)拉特旗的養(yǎng)羊場中疑似患有傳染性胸膜肺炎的羊只采集肺臟和胸水共33份，對(duì)病料進(jìn)行無菌剪碎、組織研磨并接種到改良Hayflick培養(yǎng)基中，胸水用0.22μm濾器過濾后接種到改良Hayflick培養(yǎng)基中，之后通過培養(yǎng)和純化后得到12個(gè)分離物。通過染色鏡檢、生化鑒定和血清學(xué)鑒定，
3、證實(shí)分離物與綿羊肺炎支原體MO標(biāo)準(zhǔn)株Y-98為同種。2、將符合MO的其中3個(gè)菌株，參照NCBI已知MO的16SrRNA的序列設(shè)計(jì)一對(duì)可擴(kuò)增700bp片段的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)株Y98和分離物D13、D27和XJ均擴(kuò)增出與預(yù)期結(jié)果相符的700bp片段。將電泳亮條帶凝膠回收后測序。測序結(jié)果顯示所測序列與標(biāo)準(zhǔn)株Y-98的同源性分別為97.7%、98.6%和100%。該結(jié)果確定了所得分離物為MO的某一成員，證實(shí)以上兩個(gè)地區(qū)羊場中導(dǎo)致羊傳染性胸膜肺炎的主要病原體為MO。3、本實(shí)驗(yàn)室首次采用通過酶標(biāo)儀測定MO液體培養(yǎng)
4、物的OD450處吸光值的方法繪制了MO的生長曲線。通過對(duì)分離株D13、D27、XJ和標(biāo)準(zhǔn)株Y-98在改良Hayflick培養(yǎng)基、改良KM2培養(yǎng)基、改良FM4培養(yǎng)基、改良Hayflick培養(yǎng)基和加入添加劑（OXOID）的支原體基礎(chǔ)培養(yǎng)基的生長狀況繪制了生長曲線，并通過分析和比較，結(jié)果證明改良Hayflick培養(yǎng)基是培養(yǎng)MO的最佳培養(yǎng)基。4、本實(shí)驗(yàn)室選取了泰妙霉素、氟苯尼考、卡那霉素、潔霉素、恩諾沙星、新霉素、四環(huán)素、鏈霉素、紅霉素、慶大霉素和羅紅霉素等12中抗菌藥物，對(duì)3個(gè)分離株進(jìn)行了敏感藥物的篩選，其中卡那霉素、
5、泰妙霉素、新霉素、恩諾沙星、氟苯尼考和潔霉素6種為高敏感藥物，此結(jié)果表明此6種高敏感藥物可以作為防治內(nèi)蒙古四子王旗和達(dá)拉特旗MO的首選藥物。5、本實(shí)驗(yàn)室對(duì)分離株中生長較好的一株綿羊肺炎支原體XJ株進(jìn)行了全基因組測序，并對(duì)其進(jìn)行基因家族分析，并通過基因預(yù)測和基因功能預(yù)測，對(duì)其全序列進(jìn)行分析和研究，為以后綿羊傳染性胸膜肺炎的防治和疫苗研制提供了重要的依據(jù)。關(guān)鍵詞：綿羊肺炎支原體；分離；鑒定；全基因組IsolationIdentificationofMycoplasmaovipneumoniaeandGenomicSe
6、quenceDeterminationandAnalysisAbstractMycoplasmaovipneumoniae(MO)isconsideredanemergingveterinarypathogencausingintersticialandproliferativepleuropneumoniainsheepandgoats。Thediseaseappearedtobespreadingintheworld，whichcausedgreatsufferingsandlossestothesheeph
7、usbandry。SopeopleincreasinglypayattentiontothestudyonthediseaseinfectedbyMycoplasmaovipneumoniae。AdeepresearchwasmadeonMOwithisolationandidentificationofpathogen，methodofdiagnosisandpreventionandtrentmenttoprovidethescientificbasisforcontrollingitinproduction
8、。1、12Mycoplasmastrainswereisolatedfrom33pneumonialungsandpleuraleffusionsamplesofprobablyinfectiouspneumoniaofsheepandgoatscomefromthesiziwangqianddalateqiareasinInnerMongolia。Lungtissues
