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《銀杏外種皮多糖單糖組成研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、銀杏外種皮多糖單糖組成研究［摘要］采用PMP柱前衍生化HPLC對水解后銀杏外種皮多糖中的單糖組分進(jìn)行研究。采用AgilentHC-C18色譜柱(4.6mmX250mm,5卩m)；流動相0.1mol?LT磷酸鹽緩沖液(pH6.8)-乙膳(84:16)等度洗脫；柱溫40°C,流速1mL?min-1,檢測波長245nmo從銀杏外種皮多糖水解液中分析鑒定了6種單糖，分別為甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖，其摩爾比為0.032：0.14：0.296:0.403:0.106:0.046。［關(guān)鍵詞］銀杏;多糖;單糖；PMP；HPLC［收稿日期］2013-09-04［基金項目］江蘇省科
2、技發(fā)展計劃醫(yī)藥高技術(shù)研究基金項目(BG2007609)［通信作者］*許愛華，教授，Tel:13815827628,E-mail：yzxih@21cn.com［作者簡介］茅蕾蕾，碩士研究生，Tel:13952781694,E-膽訂：zzlml989@126.com多糖的生物活性與其化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，其單糖組成作為多糖分子昔鍵的構(gòu)型、空間結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)對于其腫瘤免疫藥理學(xué)活性尤為重要。已有的研究顯示，石斛多糖的抗腫瘤活性與該多糖中含有甘露糖和葡萄糖有關(guān)［1］。從絞股藍(lán)中分離得到的酸性多糖既有抗腫瘤作用,又可增強(qiáng)免疫活性[2]。有文獻(xiàn)顯示，具有抗腫瘤活性的多糖主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、
3、鼠李糖、木糖以及糖醛酸等組成[3]。銀杏GinkgokdlobaL.系裸子植物銀杏科銀杏屬種落葉喬木，是我國特有的名貴樹種，其葉、果和外種皮等皆具有藥用開發(fā)價值，被稱為“全身都是寶的活化石"。銀杏外種皮提取物（Ginkgokdlobaexocarpextracts,GBEE）是從銀杏的外種皮中提取的活性組合物，本課題前期實驗研究結(jié)果表明，GBEE具有顯著抗腫瘤作用[4-5],并可促進(jìn)荷瘤小鼠及CTX損傷小鼠的免疫功能[6],多糖類物質(zhì)是GBEE發(fā)揮抗腫瘤及免疫促進(jìn)作用的主要有效成分[7-9],其平均相對分子質(zhì)量為11062.5[10],然而對于其多糖的單糖組成尚不明確。本研究采用PMP柱前
4、衍生化[111HPLC對GBEE中多糖（以下簡稱銀杏外種皮多糖）的單糖組成進(jìn)行分析，為進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)構(gòu)效關(guān)系研究奠定基礎(chǔ)。1材料1.1主要儀器與試劑LC-20ATvp高效液相色譜儀，SPD-20Avp紫外檢測器，CT0-20AC柱溫箱，N2000色譜工作站（日本島津公司），BT125D型1/10萬電子天平（德國sartorius公司）。甘露糖（Man,批號20120612）、一水合鼠李糖（Rha?H20,批號20120708）.葡萄糖（Glc,批號20120723）.半乳糖（Gal,批號20120508）、阿拉伯糖（Ara,批號20120808）.1-苯基-3-甲基-5-毗哇咻酮（PMP,
5、批號20111110）均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，半乳糖醛酸（GalUA,編號111646-200301）購自中國食品藥品檢定研究院；乙睛，HPLC級（美國Tedia公司）。1.2供試品GBEE2012年10月1日從江蘇泰興3個銀杏果園分別采集成熟的銀杏，經(jīng)揚(yáng)州市藥品檢驗所尹萌主任藥師鑒定為銀杏G.biloba科植物的銀杏果。由本實驗室采用手工方法將銀杏的外種皮與白果分離，將銀杏外種皮按1：8料液比加水煎煮，按發(fā)明專利方法（專利號201010251050.9）提取分離，將過濾液減壓濃縮到一定的濃度后乙醇沉淀，乙醇終濃度為80%,將沉淀物真空干燥后得灰白色粉末，即GBEEo經(jīng)紅外光譜分析
6、鑒定，GBEE中含蛋白多糖，經(jīng)苯酚硫酸法及考馬斯亮藍(lán)法測得GBEE中蛋白多糖總含量為66.4%o本實驗對批號為20121108,20121111,20121115的3個不同來源的GBEE進(jìn)行測定。2單糖組成分析方法2.1混合單糖對照品溶液的制備及衍生化精密稱取甘露糖、鼠李糖?一水、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6種單糖對照品適量，加水制成每ImL分別含甘露糖0.06mg、鼠李糖0.08mg、半乳糖醛酸0.36mg、葡萄糖0.25mg、半乳糖0.1mg、阿拉伯糖0.07mg的混合單糖對照品溶液。取該溶液250PL,加入0.5mol?LTPMP甲醇溶液250卩L、0.3mol?L-lNa
7、OH溶液250uL渦旋混合0.5min,于75°C反應(yīng)1.5h,冷卻至室溫，加入0.3mol-L-1HC1溶液250nL進(jìn)行中和，并加入水1500PL稀釋，搖勻，再加入氯仿5mL渦旋混勻0.5min,靜置5min,棄去氯仿液。重復(fù)3次后過0.45um微孔濾膜。1.2銀杏外種皮多糖的水解及衍生化精密稱取GBEE粉末適量置于具塞試管中，加入2mol?L-lH2S04溶液2.0mL,于100°C沸水浴中水解8h,冷卻至室溫。用
