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《大腸埃希菌藥敏結(jié)果和產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株的耐藥基因分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、大腸埃希菌藥敏結(jié)果和產(chǎn)超廣譜B■內(nèi)酰胺酶菌株的耐藥基因分析朱俊民1周明莉2(1河南省潔河市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科462000;2河南省鄭州鐵路疾病預(yù)防和控制屮心450052)【中圖分類號(hào)】R378.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)］1672-5085(2012)16-0089-03【摘要】目的對(duì)我院2011年上半年分離出的147株大腸埃希氏菌藥敏及耐藥基因型進(jìn)行分析，為臨床合理應(yīng)用抗生素，減少耐藥菌株的出現(xiàn)提供參考依據(jù)?！痉椒ā坎捎妹防锇９镜腣ITEK2全自動(dòng)微生物分析儀，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏分析。對(duì)產(chǎn)生超廣譜&b
2、eta;—內(nèi)酰胺酶(Extended?spectrumβ-lactamase,ESBLs)的大腸埃希菌確證實(shí)驗(yàn)，采用美國(guó)臨床檢驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ClinicalandLaboratoryStandardslnstitude,CLSI)推薦的紙片擴(kuò)散法，進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)。耐藥基因采用多重PCR檢測(cè)鑒定?！窘Y(jié)果】147株大腸埃希氏菌，ESBLs菌株有71株，百分比為48.1%O對(duì)71株ESBLs大腸埃希氏菌的質(zhì)粒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，顯示29株CTX-M基因陽(yáng)性，檢出率為40.8%；TEM基因型菌株25株，所占百
3、分比35.2%；SHV基因型菌株17株，所占百分比23.9%型；OXA基因型菌株11株，所占百分比15.4%?！窘Y(jié)論】本地臨床分離大腸埃希菌對(duì)抗生素敏感性，存在有一定的地域差別，這可能跟不同地區(qū)用藥習(xí)慣用藥歷史有關(guān)。本地區(qū)ESBLs大腸埃希菌具有較高的CTX-M型ESBLs檢出率。是本地區(qū)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌流行的的主要耐藥基因型。【關(guān)鍵詞】大腸埃希菌超廣譜b?內(nèi)酰胺酶基因型CTX-M細(xì)菌耐藥性大腸埃希菌是院內(nèi)感染監(jiān)測(cè)的主要病原菌。由于抗生素在各地區(qū)各個(gè)方面的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致大腸埃希氏菌對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥。
4、在這些耐藥的大腸埃希氏菌屮，產(chǎn)生超廣譜的β—內(nèi)酰胺酶類的菌株呈遞年增長(zhǎng)。而超廣譜β-內(nèi)酰胺酶是導(dǎo)致腸桿菌科細(xì)菌對(duì)第三代頭抱菌素耐藥的最常見(jiàn)機(jī)制，由于其耐藥基因的多樣性和傳導(dǎo)性，使得醫(yī)院感染的細(xì)菌的耐藥性越來(lái)越復(fù)雜，越來(lái)越嚴(yán)重。而且，耐藥基因也在各地區(qū)存在差異?，F(xiàn)對(duì)本院20□年上半年臨床分離的大腸埃希菌，耐藥性和ESBLs耐藥基因型進(jìn)行檢測(cè)和分析，了解大腸埃希氏菌的耐藥性和本地區(qū)ESBLs耐藥基因的分型。材料和方法1?標(biāo)本來(lái)源匯總2011年上半年潔河市中心醫(yī)院微生物室分離出的147株大腸埃希
5、氏菌。2?儀器和試劑2.1主要儀器法國(guó)梅里埃公司的VITEK2全自動(dòng)微生物分析儀。法國(guó)梅里埃公司BactAlert3D120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀。PCR擴(kuò)增儀(PC708型，北京諾士科貿(mào)有限公司)。2.2主要試劑血培養(yǎng)瓶是梅里埃公司的配套培養(yǎng)瓶，M?H瓊脂、血平板由鄭州安圖公司提供。藥敏紙片：苯畔西林(OXJOmg)、阿莫西林/棒酸(AMC,20/10mg)＞氨曲南(ATM,30mg)^頭泡噬厲(CTX,30mg)、頭泡他噪(CA乙30mg)、頭抱噬月虧/克拉維酸(CTX/CLA,20/10mg)＞頭孑包曲松(C
6、RO,30mg)＞頭抱畔咻(C乙30噸)等，由北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供。PCR試劑盒和基因檢測(cè)的相關(guān)試劑由鄭州華美生物工程公司提供。質(zhì)控菌株：人腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603o3.藥敏檢測(cè)的方法3.1血液標(biāo)本采用法國(guó)梅里埃公司BactAlert3D120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。細(xì)菌鑒定和藥敏分析采用法國(guó)梅里埃公司的VITEK2全自動(dòng)微生物分析儀，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏分析。結(jié)果如下表一。3.2對(duì)產(chǎn)生超廣譜β—內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的大腸埃希菌確證實(shí)驗(yàn),采用Kir
7、by-Bauer紙片擴(kuò)散法，并嚴(yán)格按照美國(guó)臨床檢驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。按照CLSI規(guī)定：頭卿塞月虧(CTX)30µg/片和頭抱噬月虧加克拉維酸(CTX-CA)30µg/片，頭泡他唳(CAZ)30µg/片和頭孑包他噪加克拉維酸(CAZ-CA)30µg/片，2組中任何一?組含克拉維酸的抑菌環(huán)直徑比不含克拉維酸的紙片抑菌環(huán)直徑大于或等于5毫米，即可判定為超廣譜β—內(nèi)酰胺酶(ESBLs)陽(yáng)性。147株大腸埃希氏菌經(jīng)檢測(cè)，有71株ESBLs
8、陽(yáng)性的菌株。陽(yáng)性率為48.1%。4?基因檢測(cè)的方法4.1質(zhì)粒提取將分離的71株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌分別接種于5.0mlLB培養(yǎng)液中，加入氨茉青霉素至50?100μg/ml,37°C恒溫振蕩培養(yǎng)7h。采用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒DNA,保存于?20°C備用。4.2基因檢測(cè)均為聚合酶鏈法，各種靶基因擴(kuò)增反應(yīng)體系如下，以50.0μl體積計(jì)算，各成份分別為：試劑加入量(μl)終濃度正反向引
