苦參堿通過(guò)bid介導(dǎo)的線粒體通路誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞凋亡的研究

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1、廈門(mén)大學(xué)碩士學(xué)位論文苦參堿通過(guò)Bid介導(dǎo)的線粒體通路誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞凋亡的研究姓名：王趫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：胡天惠201205摘要食管癌是一種高發(fā)的致命性惡性腫瘤，這些年來(lái)在美國(guó)及其他發(fā)達(dá)國(guó)家的迅速發(fā)展。在2011年確診的病例超過(guò)167200例，在中國(guó)發(fā)病率也是居高不下。在食管癌的治療手段中以手術(shù)和放化療為主，但是由于食管癌對(duì)放化療有很高的耐受性，而手術(shù)治療又增加了患者的痛苦，所以我們亟待找到一種新的有效的藥物治療食管癌的方法?？鄥橹袊?guó)傳統(tǒng)中藥，系豆科植物苦參的干燥根，是以苦參次堿15酮為基本結(jié)構(gòu)的化合物，主要來(lái)源于苦參根及苦豆子的提取物。苦參提取物中含有多種生物堿

2、，最主要成分為氧化苦參堿和苦參堿?？鄥A對(duì)人體發(fā)揮很多藥理作用，其中最值得我們注意的是苦參堿的抗癌作用，前人研究表明苦參堿可以抑制多種腫瘤，例如hela，結(jié)腸癌，胃癌，骨肉瘤等，但是這些對(duì)苦參堿的作用機(jī)制仍然處于初級(jí)階段。Bid(BH3intcractingdeathagonist)是一個(gè)具有多種功能的且只含有BH3結(jié)構(gòu)域的Bcl．2家族成員。研究表明，Bid在DNA損傷修復(fù)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮雙重功能。同時(shí)，Bid可以通過(guò)激活不同的信號(hào)通路對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展起到抑制或者促進(jìn)的效果，而且研究體系的不同也可能導(dǎo)致Bid表現(xiàn)出不同的生物學(xué)功能。本論文系研究苦參堿在人食管癌細(xì)胞體內(nèi)、體外抗癌

3、的機(jī)制。首先，苦參堿在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)細(xì)胞存活率呈時(shí)間．劑量依賴的關(guān)系，并且通過(guò)上調(diào)蛋白P53和P2l誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使人食管癌細(xì)胞周期阻滯在G0／Gl期，苦參堿對(duì)凋亡通路上關(guān)鍵蛋白的調(diào)節(jié)也促進(jìn)了人食管癌細(xì)胞的凋亡。而后將食管癌鱗狀細(xì)胞Eca．109對(duì)裸鼠進(jìn)行皮下成瘤實(shí)驗(yàn)并對(duì)腫瘤進(jìn)行解剖分析。實(shí)驗(yàn)證明苦參堿通過(guò)下調(diào)BCL．2／Bid蛋白，上調(diào)caspase．9蛋白的活性促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明苦參堿的促食管癌鱗狀細(xì)胞Eca．109凋亡是通過(guò)線粒體通路而并非蛋白受體通路，在苦參堿作用下蛋白Bid在凋亡過(guò)程中從細(xì)胞核向線粒體轉(zhuǎn)移。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)在裸鼠體內(nèi)苦參堿有很明顯的抑制體

4、內(nèi)腫瘤的作用。促進(jìn)凋亡因子(AlF)激活依賴caspase和非依賴caspase通路。PAI沖是非依賴caspase凋亡通路的重要活化因子，DNA破壞后生成PAR的聚合物。過(guò)度激活PAI沖啟動(dòng)了細(xì)胞核信號(hào)釋放到線粒體內(nèi)并出發(fā)了AlF的釋放，AIF隨后從線粒體中釋放并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核引起外圍染色體的沉積，產(chǎn)生大DNA碎片最終引起細(xì)胞毒性。本論文證明苦參堿可以加劇PAI沖的激活引起降解，并且證實(shí)苦參堿可以進(jìn)入細(xì)胞核，激活非依賴性caspase通路引起外圍染色體沉積，而后引起細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞內(nèi)總AIF表達(dá)量和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)AIF表達(dá)量在苦參堿誘導(dǎo)下在并未出現(xiàn)有意義的量的變化。我們推測(cè)在人食管癌細(xì)胞

5、凋亡中AIF介導(dǎo)的非依賴性caspase通路并未起作用。本論文認(rèn)為天然藥物苦參堿可以作為人食管癌治療的新型潛在性治療手段。關(guān)鍵詞：苦參堿；食管癌；凋亡ⅡAbstractEsophagealcancerisoneofthedeadliestc鋤cers舳dtheincidenceofesophagealadenocarcinomahasincreasedrapidlyintheUnitedStatesandotherdeVelopedcountriesinrecentyears．In20ll，167200estimatednewcaseswercdiagnosed，withahighinc

6、idenceofnewcasesinChina．Althoughesophagealsquamouscellcarcinomawithsu唱icaltreatmentisgiVenpriorit)rto，localradiotherapy獅dauxilia巧chemicaldrugtherapyareequalimportantinprognosis．HoweVeresophagealcancerishi曲lyresistantt0chemotherapy．Therefore，discoVe叮ofnoVeldmgstotreatesophagealc鋤cerisessential．Mat

7、rine，amemberofSophorafamily，isanalkaloidfoundinplants，andproducesplethoraphanllacologicaleff．ectS，includinganti—cancerefrects．studiesconfimedthatmatrinec肌inhibitaVariet)，oftumorcells，forexample，heIa，gastrictumor，colore