小麥孢囊線蟲滯育機理與大豆孢囊線蟲蛋白質(zhì)組分析

小麥孢囊線蟲滯育機理與大豆孢囊線蟲蛋白質(zhì)組分析

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1、4.4.1.2H.a(chǎn)venae滯育孢囊及非滯育孢囊差異蛋白質(zhì)的分析???????????一764.4.2大豆孢囊線蟲蛋白質(zhì)組的分析?????????????????????.774.4.2.1H.glycines白色雌蟲與褐色孢囊表達相同蛋白質(zhì)的分析??????????774.4.2.2H.glycines白色雌蟲與褐色孢囊差異表達蛋白質(zhì)的分析??????????785結論?????????????????????????????????????????????8l5.1不同溫度處理對小麥孢囊線蟲孵化的影響?????????????????815.2不同無機離子對小麥孢

2、囊線蟲孵化的影響?????????????????815.3小麥孢囊線蟲解除滯育的過程中代謝產(chǎn)物的變化??????????????8l5.4小麥孢囊線蟲及大豆孢囊線蟲蛋白質(zhì)組的分析???????????????82參考文獻?????????????????????????????一83致謝?????????????????????????????????一94山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文中文摘要小麥孢囊線蟲(cerealcystnematode,CCN,Hetoroderatlveglae)病在世界范圍造成嚴重的危害,是制約小麥及大麥生產(chǎn)的主要因素之一。為明確山東泰安小麥孢

3、囊線蟲的孵化特點,于2012年對自然及室內(nèi)條件下的小麥孢囊線蟲在室內(nèi)離體條件下,開展了溫度及無機離子對其孵化影響的試驗;為了明確小麥孢囊線蟲在解除滯育過程中生理變化,本研究對3種不同滯育程度孢囊的幾種代謝物質(zhì)進行了比較;為了深入研究小麥孢囊線蟲的滯育機制及大豆孢囊線蟲(soybe孤cystnematode,SCN,Heteroderaglycines)色雌蟲與褐色孢囊的蛋白質(zhì)差異,本研究分別對兩種孢囊的蛋白質(zhì)組進行了分析。研究結果如下:1.不同溫度對小麥孢囊線蟲孵化的影響通過試驗,發(fā)現(xiàn)小麥孢囊線蟲孢囊卵和自由卵對溫度處理的響應一致。未經(jīng)低溫處理的孢囊卵和自由卵無線蟲孵出

4、,4"C低溫處理能使小麥孢囊線蟲解除滯育,15"(2溫育是孢囊卵和自由卵孵化的最適溫度,4—15℃線蟲孵出量明顯高于15℃、15-4"C、4.25℃、15.25"C、25℃恒溫、25_4℃、25—15℃等溫度處理。將孢囊置于4"C低溫處理150d后,其最高累積孵化率達到72%,明顯高于4"C低溫處理30d后轉(zhuǎn)至15"C溫育的孵化率(56.2%)。小麥孢囊線蟲白色雌蟲在4"C、15"C、20℃、25"(2四個溫度處理下均沒有線蟲孵出,溫度越低其變褐的速度越慢。白色雌蟲內(nèi)的卵處于不同的發(fā)育時期,其中O(幼蟲形成)時期形態(tài)的卵占12.7%,絕大多數(shù)的卵都處于發(fā)育初期階段。隨著

5、時間的延長,初期形態(tài)的卵逐漸發(fā)育,N(原腸形成)、O兩發(fā)育時期的卵逐漸增多,尤其O時期的卵,在30d時達到72.7%。2.不同的無機離子對小麥孢囊線蟲孵化的影響本試驗供試5種無機化合物CaCl2、MgCl2、FeCl3、ZnCl2、CuCl2,分別作用于自然狀態(tài)下滯育的小麥孢囊線蟲、非滯育的小麥孢囊線蟲及經(jīng)低溫處理后仍滯育的小麥孢囊線蟲,發(fā)現(xiàn)ZIl2+溶液對小麥孢囊線蟲有明顯的刺激作用,且對非滯育CCN的刺激作用更加明顯,F(xiàn)e3+溶液也表現(xiàn)一定的刺激作用,但其作用明顯小于Zn2+溶液,且在試驗過程中,Zn2+溶液中孵化出的線蟲是活動的,而Fe3+溶液中的線蟲是僵直不動的

6、。其機制還有待進一步研究。l小麥孢囊線蟲滯育機理及大豆孢囊線蟲蛋白質(zhì)組分析3.小麥孢囊線蟲在解除滯育過程中代謝產(chǎn)物的變化小麥孢囊線蟲具有高溫滯育,低溫解除滯育的特性。滯育的小麥孢囊線蟲經(jīng)4℃0周、5周和lO周,在誘導解除滯育的過程中總糖的含量沒有顯著性變化;糖原的含量是逐漸下降;低溫處理10周的孢囊海藻糖的含量明顯降低;甘油含量明顯降低;海藻糖酶及酯酶的活性明顯增高;酯酶同工酶電泳中,4。C一10周的孢囊的電泳條帶最多,共有4個條帶,其遷移率Rf值依次為0.21、O.24、0.30、0.34。小麥孢囊線蟲的非滯育率越高,其蛋白質(zhì)含量也就越高。在蛋白質(zhì)SDS.PAGE電泳

7、圖譜中滯育的孢囊和4"C一5周的孢囊有分子量15.5KDa的譜帶而4"C一10周的孢囊沒有,同時分析結果表明該蛋白在滯育孢囊的蛋白中所占比例最大;4"c一5周孢囊的21.8KDa蛋白譜帶比較淺,蛋白量較少。4.小麥孢囊線蟲及大豆孢囊線蛋白質(zhì)組的分析利用雙向電泳技術分離兩種孢囊的全蛋白,得到差異蛋白點,質(zhì)譜分析鑒定差異蛋白。Havenea滯育和非滯育卵中分別有409、412個蛋白表達,二者共同表達蛋白質(zhì)401個,差異蛋白19個,質(zhì)譜鑒定出10個差異蛋白質(zhì);大豆孢囊線蟲白色雌蟲及褐色孢囊分別表達了176、78個蛋白點,差異蛋白點有165個:質(zhì)

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