mir-21在大鼠肝卵圓細胞活化和增殖過程中作用研究

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1、萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文目錄一、英文縮略詞中英文對照表??????????．．1二、論文摘要中文摘要???????????????2英文摘要???????????????5三、論文正文前言????????????????．8材料和方法??????????????．10結(jié)果????????????????．21分析與討論??????????????．26參考文獻???????????????30四、附錄????????????????．．34五、致謝????

2、????????????．．36六、綜述及參考文獻?????????????．37七、學位論文獨創(chuàng)性聲明????????????48萬方數(shù)據(jù)縮略詞表(按字母順序)縮寫詞英文全稱中文全稱2一AAFAPSBCADEPCHRPmiRNAmRNA0VPCRPBSPHPMSF2-acetylaminofluoreneAmmoniumpersulfateBovineserumalbuminDiethyIpyrocarbonateHorseradishperoxidasemicroRNAmesSengerRN

3、AOvaIcelImarkerPolymerasechainreactionPhosphatebuffersalinePartialhepatectomyPhenylmethylsulfonylfluorideRealtime·-PCRRealtime··polymerasechainreactionRISCRT-PCRSDSTEMEDTrisWBRNA—inducedsilencingcomplex，ReversetranscriptionpolymerasechainreactionSodi

4、umdodecylsulfate2．乙酰氨基芴過硫酸胺牛血清白蛋白焦碳酸二乙酯辣根過氧化物酶微dxRNA信使RNA卵圓細胞標記聚合酶鏈式反應磷酸鹽緩沖液部分肝切除苯甲基磺酰氟化物實時熒光定量聚合酶鏈反應RNA誘導基因沉默復合物逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應十二烷基磺酸鈉N，N，N。，N’一TetramethyIethyIenediamiN，N，N。，N。一四甲基乙二ne胺Trisamine三羥甲基氨基甲烷Westernblot免疫蛋白印跡萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文miR-21在大鼠肝卵圓細胞活化和增

5、殖過程中作用研究中文摘要背景2肝臟是人體的必需器官之一，其再生能力極強。在正常生理狀態(tài)下，人體中成熟且已經(jīng)完全分化的肝細胞活化是肝臟再生的主要方式。然而，在各種病理性的嚴重肝臟損害、以及正常的肝細胞受到各種原因而導致其增殖與分化處于抑制狀態(tài)的肝部分切除時，肝臟的一種干細胞(肝卵圓細胞)活化與增殖成為再生的主要方式‘1】【2】【3】【41。肝卵圓細胞可能是肝干細胞在某階段的特殊表現(xiàn)形式，目前對于肝干細胞、肝卵圓細胞、肝祖細胞的界定并未達到共識。肝卵圓細胞在體內(nèi)分布廣泛，終末膽管是肝卵圓細胞的主要分

6、布區(qū)域，也就是我們文獻中常常敘述的小葉間膽管或Hering管，同時也是門靜脈周圍處于肝細胞和膽管細胞之間的特殊區(qū)圳5】【61。肝卵圓細胞同時具備干細胞多向分化的潛能，肝卵圓細胞可以分化為肝細胞、膽管細胞，同時甚至可以分化胰腺、小腸、神經(jīng)內(nèi)分泌等器官的重要細胞【71。肝卵圓細胞在肝臟許多疾病中發(fā)揮著極其重要的作用，比如慢性肝炎、肝硬化、酒精性肝病、遺傳性色素沉著癥、脂肪肝甚至肝癌，研究中發(fā)現(xiàn)肝卵圓細胞的數(shù)目決定病程的嚴重程度和轉(zhuǎn)劇8】【9】【10】【111。研究肝卵圓細胞活化與增殖的內(nèi)在機理對于肝

7、臟的發(fā)育和胚胎生物學以及各種肝病疾病進程的原因闡述具有重要意義，將肝卵圓細胞進行實驗室培養(yǎng)后移植到人體內(nèi)而對重要肝病如肝纖維化、急性肝壞死等進行治療或許會成為未來研究的重要方向，調(diào)控肝干細胞自我分化和更新的調(diào)控失控用于肝細胞癌的治療，甚至可以用于替換先天性疾病所缺失和突變的基因，為肝臟疾病新的治療方式提供新的細胞生物學基礎。目的：1．研究miR一21在大鼠肝卵圓細胞增殖模型中的差異表達；2．通過生物信息學分析miR．21可能影響肝卵圓細胞增殖的靶蛋白；3．研究其靶蛋白在大鼠肝卵圓細胞增殖過程中的

8、調(diào)控機制。方法：1．動物模型：采用經(jīng)典的2-AAF／PH法誘導動物模型，并同時設立肝卵圓細胞活2萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文化組、普通肝切除組，分別與0、6、12、24、72、268小時處死動物采集肝臟標本，普通HE染色后和免疫組化后，光鏡下觀察卵圓細胞活化狀況；2．miR．21的檢測：設計miR一21的引物后，采用Stem—loopRT-PCR和Real．timePCR的方法檢測miR．21在卵圓細胞活化組和肝切除組中每個時間點的相對表達；3．靶蛋白的分析：通過多個miRNA在線數(shù)據(jù)庫，預