趨化因子配體21在骨癌痛大鼠脊髓的表達(dá)及其作用

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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文趨化因子配體21在骨癌痛大鼠脊髓的表達(dá)及其作用姓名：柳嬌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：申文2012-04徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文趨化因子配體21在骨癌痛大鼠脊髓的表達(dá)及其作用中文摘要目的探討趨化因子配體21(CCL21)在骨癌痛大鼠脊髓的表達(dá)及其作用。方法第一部分：健康雌性SD大鼠42只，體重160～1809，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠隨機(jī)分為7組(n_6)：正常組(naive組)、假手術(shù)組(sham組)、骨癌痛3天組(BCP3)、骨癌痛7天組(BCP7)、骨癌痛14天組(BCPl4)、骨癌

2、痛21天組(BCP21)、骨癌痛28天組(BCP28)。分別于術(shù)前1d，術(shù)后1、3、5、7、14、21、28d測定大鼠接種側(cè)后肢的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)；采用蘇木素一伊紅(hematoxylin．eosin，HE)染色法觀察各組大鼠接種側(cè)脛骨的病理變化；采用免疫印跡法檢測各組大鼠脊髓CCL21的表達(dá)水平。第二部分：健康雌性SD大鼠18只，體重160～1809，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠隨機(jī)分為三組(n-6)：正常組(naive組)、假手術(shù)組(sham組)、骨癌痛組(BCP組)。分別于術(shù)前1d，術(shù)后1、3、5、7、1

3、4d測定大鼠接種側(cè)后肢的機(jī)械縮足反射閾值(PMwT)，采用HE染色法觀察各組大鼠接種側(cè)脛骨的病理變化；采用免疫熒光技術(shù)觀察各組大鼠脊髓CCL21的表達(dá)部位。第三部分：健康雌性SD大鼠56只，體重160～1809，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其隨機(jī)分為7組(n=8)：假手術(shù)組(I組)、假手術(shù)+溶媒PBS組(II組)、假手術(shù)+CCL21中和抗體組(III組)、骨癌痛組(1V組)、骨癌痛+溶媒PBS組(V組)、骨癌痛+對(duì)照IgG組(VI組)和骨癌痛+CCL21中和抗體組(VII組)。Ⅳ組、V組、Ⅵ組和Ⅶ組采用脛骨骨髓腔內(nèi)注射Walk

4、er-256乳腺癌細(xì)胞制備脛骨癌痛模型，I組、II組和III組骨髓腔內(nèi)注射等體積生理鹽水，各組于建模后第14天觀察大鼠脛骨的影像學(xué)表現(xiàn)。其中V組、Ⅵ組和Ⅶ組于注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞后第14天經(jīng)L5～6蛛網(wǎng)膜下腔分別注射溶媒PBSl51al、親和純化的正常羊IgGlolag／15I．tl和CCL21中和抗體組10}tg／159l；II組和III組于相同時(shí)點(diǎn)經(jīng)L5～6蛛網(wǎng)膜下腔分別注射徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文濰：媒PBSl5p,1、CCL21中和抗體組10p．g／151xl。于注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞或

5、生理鹽水前l(fā)d(Zo，即基礎(chǔ)值)、注射Walker．256乳腺癌細(xì)胞或生理鹽水后1、3、5、7、14d(Zl～5)及給藥后0．5、l、2、4、8、12、24、48h(T1．8)時(shí)測定大鼠接種側(cè)后肢的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)。結(jié)果(1)疼痛行為學(xué)：造模后第7、14、21、28天，骨癌痛大鼠接種側(cè)后肢PMWT降低(P

6、痛行為學(xué)：造模后第7、14天，骨癌痛大鼠接種側(cè)后肢PMWT降低(P

7、高(P<0．05)，在8h達(dá)到峰值(P<0．01)；與Ⅳ、V組比較，Ⅵ組鞘內(nèi)給藥后PMWT差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(胗0．05)。結(jié)論1．脛骨癌痛大鼠脊髓水平CCL21表達(dá)量上調(diào)。2．CCL21在脊髓背角表達(dá)于神經(jīng)元。3．鞘內(nèi)注射CCL21中和抗體，能夠減輕脛骨癌痛大鼠已產(chǎn)生的痛覺過敏。提示趨化因子CCL21參與大鼠脛骨癌痛的產(chǎn)生和維持，并且可能通過脊髓背角的神經(jīng)元在這個(gè)過程中發(fā)揮作用。關(guān)鍵詞骨癌痛；CCL21；痛覺過敏；脊髓徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文TheexpressionandroleofCCL21inthespinalof

8、rattibialD0necancerDalnmonel1●1●AbstractObjeetiveThepresentstudywasdesignedtoinvestigatetheexpressionandroleofChemokineCCL21inthespinalofrattibialbonecancerpainmodel．