cbp通過調節(jié)組蛋白乙酰化水平參與神經病理性疼痛機制的研究

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1、中南大學博士學位論文CBP通過調節(jié)組蛋白乙?；絽⑴c神經病理性疼痛機制的研究姓名：李倩申請學位級別：博士專業(yè)：麻醉學指導教師：郭曲練20120530八年制博士學位論文中文摘要摘要目的構建SD大鼠坐骨神經慢性縮窄性損傷(CCI)模型，觀察大鼠疼痛行為學及組蛋白乙酰轉移酶CBP表達變化趨勢。鞘內注射CBPshRNA觀察脊髓水平抑制CBP對大鼠神經病理性疼痛以及對組蛋白乙?；?、COX．2表達的影響，研究CBP神經病理性疼痛發(fā)病的具體機制。方法1．成年雄性SD大鼠30只，隨機分為3組：正常組(n=5)、Sham組(n_5)和CCI組(n=20)。CCI組建立左

2、側CCI模型，Sham組僅暴露左側坐骨神經而不結扎，術前1天及術后1、3、5、7、10、12、14、21天測定左后足機械痛閾和熱痛閾，術后3、7、14、21天分批灌注處死，取腰段脊髓免疫組化方法觀察組蛋白乙酰轉移酶CBP的表達變化。2．成年雄性SD大鼠40只，鞘內置管成功5天后建立左側CCI模型，隨機分為4組(n=10)：Sham+NS組、CCI+NS組、CCI+NC組、CCI+CBPshRNA組。CCI術后7天鞘內分別注射生理鹽水、陰性對照病毒載體(RNAi．NC．LV)、CBPshRNA病毒載體(CBPRNAi．LV)各209l。術前1天、術后3、5、7

3、、1O、12、14天測定大鼠左后足機械痛閾和熱痛閾。于CCI術后14天取腰段脊髓，免疫組化法檢測CBP、Ac—H3、Ac．H4、COX．2形態(tài)學表達的變化，RT-PCR檢測CBP、COX一2mRNA水平的變化，westernblot檢測COX．2蛋白水平的變化。結果1．與Sham組相比，CCI組大鼠術側后足機械痛閾和熱痛閾明顯下降，在術后第7天最明顯，持續(xù)至第21天(氏O．05)。腰段脊本研究得到國家自然科學基金(編號：81000478)資助I八年制博士學位論文中文摘要髓免疫組化結果表明CBP陽性細胞以灰質表達為主，灰質全層均有表達，脊髓背角I"-'III層

4、高表達，陽性顆粒主要位于胞核，胞漿少量存在。CCI組腰段脊髓背角淺層的CBP陽性細胞數從術后第3天開始明顯增多，第14天達到高峰，并持續(xù)至第21天(尸0．05)。CCI大鼠腰段脊髓CBP、Ac．H3、Ac—H4、COX一2陽性細胞數以及CBPmRNA、

5、COX一2mRNA、COX一2蛋白均明顯升高(尸

6、4．鞘內注射CBPshRNA發(fā)揮的鎮(zhèn)痛作用可能與抑制CBP對組蛋白H3、H4的乙?；瘡亩绊懱弁匆蜃覥OX．2的表達有關。關鍵詞CBP，乙?；M蛋白，慢病毒，神經痛，RNA小分子干擾八年制博士學位論文英文摘要ABSTRACTObjectivesToinvestigatethetime—dependentvariationtendencyofpainbehaviorandspinalexpressionofCBPinaratmodelofsciaticnervechronicconstrictioninjury(CCI)model．Silencethespin

7、alexpressionofCBPgenebyintrathecalCBPsmallhairpinRNA(shRNA)，toresearchtheeffectofCBPinneuropathicpain．Methods1．ThirtymaleSDratswererandomlydividedintogroupNormal(n=5)，Sham(n=5)andgroupCCI(n=20)．IngroupCCI，leftsciaticnerveCCImodelwereestablishedaccordingtoBennettandXie，ingroupSham，l

8、eftsciaticnerveswereonlyex