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《非肌肉肌球蛋白ⅱ型重鏈a、b單克隆抗體的制備與鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重鏈A、B單克隆抗體的制備與鑒定姓名：吳海珍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：周恩民20120615山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要豬繁殖與呼吸綜合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的豬的重要傳染病之一，臨床上主要表現(xiàn)為妊娠母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及弱仔等繁殖障礙及各年齡段豬的呼吸道癥狀和高死亡率。目前，PRRS已遍及全球主要養(yǎng)豬國家和地區(qū)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。PRRSV進入細胞的過程是依賴受體實現(xiàn)的
2、，目前已鑒定的PRRSV的細胞受體有4個：硫酸乙酞肝素HS、唾液酸粘附素Sn、CDl63及波形蛋白Vimentin。HS主要是吸附PRRSV到易感細胞上，Sn介導(dǎo)PRRSV的內(nèi)吞，CDl63協(xié)助Sn內(nèi)吞并介導(dǎo)PRRSV復(fù)制的脫衣殼、釋放過程，Vimentin與其它中間絲蛋白組成多聚體參與PRRSV在細胞內(nèi)的復(fù)制和遷移。非肌肉肌球蛋白II型(NonmusclemyosinII，NM．II)廣泛存在于肌細胞和非肌細胞中，在細胞遷移、細胞吸附、胞質(zhì)分裂及胞內(nèi)物質(zhì)運輸?shù)劝l(fā)揮著重要的作用。非肌肉肌球蛋白II型重鏈(NonmusclemyosinheavychainII，NMHC
3、．II)可分3種亞型：NMHCII—A、NMHCII．B和NMHCII—C，三者氨基酸同源性達60％一80％的，但其氨基端和羧基端氨基酸序列存在明顯差異，可據(jù)此制備特異性抗體識別不同亞型。本實驗室利用PRRSVGP5蛋白的單克隆抗獨特型抗體(MAb2．5G2)在Marc．145細胞中檢測到NMHCII．A并進行探究，研究結(jié)果證明NMHCII．A羧基端蛋白可以降低PRRSV對Marc．145細胞的感染力，而NMHCII．B羧基端蛋白能夠顯著增強PRRSV感染細胞。這些研究結(jié)果表明：NMHCII．A、NMHCII．B在PRRSV感染Mare．145細胞過程中發(fā)揮作用。本研
4、究通過蛋白純化、免疫BALB／cd、鼠、細胞融合與亞克隆技術(shù)，成功獲得了針對NMHCII．A及NMHCII．B羧基端蛋白的單克隆抗體，均屬于IgG亞類。這些單克隆抗體對相應(yīng)抗原表現(xiàn)出高度特異性，相互之間不存在交叉反應(yīng)。I-ELISA和westernblot結(jié)果確定NMHCII．A的單克隆抗體結(jié)合域在NMHCII．A1812．1894AA處，NMHCII．B的單克隆抗體抗原結(jié)合域在NMHCII．B1759．1903AA處；疊JJHELISA實驗顯示各單克隆抗體的抗原結(jié)合表位相同或相近。通過制備小鼠腹水和抗體純化技術(shù)，獲得純化單克隆抗體進行細胞實驗。問接免疫熒光實驗表明單
5、克隆抗體可以結(jié)合Marc．145細胞上的活性抗原，不同劑量的單克隆抗體與Marc-145細胞的結(jié)合力度與其濃度成正比：劑量越大，熒光信號越強。免疫沉淀實驗進一步證實了單克隆抗體的生物活性。NMHCII．A及NMHCII．B羧基端蛋白單克隆抗體的制備為探究NMHCII-A、NMHCII．B與PRRSV之間的具體非肌肉肌球蛋白II型重鏈A、B單克隆抗體的制備與鑒定關(guān)系奠定了‘基礎(chǔ)。一關(guān)鍵詞：PRRSV；非肌肉肌球蛋白lI型重鏈A、B：單克隆抗體；特性鑒定n山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文PreparationandC’racterization0fMonoclona’Antilm
6、diesreparationanhaonoclonalAntiboiesraCterlZatlon0tJ：ⅥagainstNon-muscleMyosinHeavychainIIAandBAbstractPorcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)isaseverediseasecausedbyPRRSvirus(PRRSV)．Itmainlyresultsinreproductivedisorder，suchaspremature，abortion，fetaldeath，mummyorweakgeneration．A
7、nditcouldinduceporcinerespiratorysyndromeatvarietyofageswithhighmortality．PRRShasbeenprevailedinthemajorpig—raisingcountriesanddistrictsintheworld，andcausedgreateconomiclosstotheworld’Shogindustry．TheprocessPRRSVgetintocellsisreceptorsdependent．Therealefourreceptorsidentifiedno
