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《紅笛鯛非特異性細胞毒性細胞活性及其受體表達的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、廣東海洋大學碩士學位論文紅笛鯛非特異性細胞毒性細胞活性及其受體表達的研究姓名：周晴申請學位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導教師：簡紀常201206紅笛鯛非特異性細胞毒性細胞活性及其受體表達的研究摘要本論文以我國南方主要海水養(yǎng)殖魚類之一——紅笛鯛(Lutjanussanguineus)為研究對象，制備了兔抗紅笛鯛非特異性細胞毒性細胞(NCC)受體NCCI沖．1融合蛋白的抗血清，初步建立了NCC的有效分離手段，探討了NCC的活性以及抗血清對NCC活性的抑制作用，成功構建了真核表達載體PGBKT7-NCCRP，研究了NCCRP．1的基因表達。將表
2、達的NCCRP．1融合蛋白進行純化并利用純化后的融合蛋白按常規(guī)方法免疫新西蘭純種大白兔，制各了兔抗紅笛鯛NCCRP．1融合蛋白的抗血清，ELISA測定其效價為1：32000。利用該抗血清進行免疫組織化學分析，發(fā)現(xiàn)NCCRP．1只在頭腎、脾臟和胸腺的特定細胞中表達。為深入研究NCCRP．1抗血清對紅笛鯛NCC活性的抑制作用，首先分離紅笛鯛頭腎中的NCC，選用NCC特異性的作用對象之一——人類細胞系K562為靶細胞，通過流式細胞儀檢測了NCC殺傷K562的活性；并在效應細胞和靶細胞中加入一定量的兔抗紅笛鯛NCCRP．1融合蛋白抗血清，分析了
3、抗血清對NCC活性的抑制作用。結果表明，用48％的Percoll細胞分離液，在400xg，30min的條件下分離出來的NCC效果最佳，流式細胞儀檢測NCC占整個白細胞的比例約為(44．8+0．8)％。當效應細胞NCC和靶細胞K562以一定的比例混合后，流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)NCC具有很強的殺細胞活性，且這個活性并不隨著兩種細胞的比例變化而變化；當效應細胞和靶細胞比例為l：l并加入不同體積倍比稀釋的抗血清時，所制備的兔抗紅笛鯛NCCRP．1融合蛋白抗血清可抑制NCC的活性，其抑制率隨著抗血清體積的變化而變化。利用PGBKT7質粒，成功構建了真
4、核表達載體PGBKT7-NCCI沖，為進一步研究NCCRP．1蛋白的功能奠定基礎。應用Real．timePCR技術，研究脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)刺激紅笛鯛后NCCRP．1在不同組織里的表達水平差異，結果發(fā)現(xiàn)，LPS刺激紅笛鯛24h后NCCRP一1在紅笛鯛頭腎、脾臟、胸腺、肝臟、心臟、腦、肌肉和腸組織中均有表達，其中頭腎表達量最高，脾臟次之，然后依次是肝臟、腦、肌肉、胸腺和腸，心臟表達量最少。LPS、苯酚和CuS04刺激紅笛鯛后，隨著刺激時間的增長，NCCRP．1表達量在各組織達到峰值的時間不同。以頭腎為模式
5、組織，RT-PCR的結果顯示，紅笛鯛NCCRP-l在LPS、苯酚和CuS04的刺激下的表達模式相似，隨著時間的增加NCCRP．1表達量逐漸增加，分別在24h、9h和12h處達到最高，達到對照組表達量的52倍、30倍和24倍左右，接著開始下調。本文初步探討了NCC的活性及其受體NCCRP．1在先天性免疫中的基本功能，I為紅笛鯛疾病防治提供一定的理論依據(jù)，為進一步研究NCCRP．1蛋白的生物學特性奠定基礎。關鍵詞：紅笛鯛，NCCRP．1，NCC，表達，熒光定量PCRIIStudyontheactivityofnonspecificcytot
6、oxiccellandexpressionofitsreceptorinRedSnapper,LutjanussangumeusAbstractRedSnapperLutjanussanguineus，whichisoneofthemostubiquitousspeciesculturedmarinefishinsouthofChina,wasstudiedinthepaper．RabbitantiserumagmnstfusionproteinofnonspecificcytotoxiccellreceptorNCCRP-lWaspr
7、epared，effectiveNCCisolationmethodWaspreliminarilyestablished，theactivityofNCCandinhibitoryactionofrabbitantiserumtotheactivitywerestudied，recombinantofeukaryoticexpressionvectorPGBl0T7-NCCltPwassuccessfullyconstructed，andgeneexpressionofNCCRP．1Wasstudied．Thefusionprotei
8、nofNCCRP-1Waspurified，andtheanti·NCCRP—lserumwasobtainedbyimmuningNewZealandpedigreewhiterabbitswiththe
