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《誘導(dǎo)多能干細胞向生殖細胞分化的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、博士學(xué)位論文誘導(dǎo)多能干細胞向生殖細胞分化的實驗研究DERIVATIONOFGERMCELLSFROMINl3UCEDPLURIPOTENTSTEMCELLS姓名：學(xué)號：指導(dǎo)教師：申請學(xué)位：學(xué)科專業(yè)：研究方向：培養(yǎng)單位：基金資助：蔡恒0087109023徐晨教授博士人體解剖與組織胚胎學(xué)生殖生物學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(2010CB945201)2012年5月上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)
2、表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學(xué)位論文作者簽名：蔣恒日期：刀，)年，月7日上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于
3、不保密倒。(請在以上方
4、框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：搽恒指導(dǎo)教師簽名：日期：夕f聲年上月7日日期：2口，2年歲月礦日誘導(dǎo)多能干細胞向生殖細胞分化的實驗研究摘要近年來，在世界范圍內(nèi)，男性精子的數(shù)量和質(zhì)量呈下降趨勢，男性不育癥的發(fā)病率在逐年上升，其中約50％是由于生精障礙所致。干細胞具有自我更新能力和多向分化潛能，是生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點之一。自2006年，來源于體細胞的誘導(dǎo)多能干細胞(inducedpluripotentstemcells，iPS細胞)誕生以來，由于iPS細胞具有與胚胎干細胞(embryonicstemcells，ES細胞)相似的特性，且來源廣泛、
5、取材方便，可以獲得疾病或患者特異性的iPS細胞，且不涉及免疫排斥、醫(yī)學(xué)倫理學(xué)等問題，具有ES細胞所不能比擬的優(yōu)勢，因而受到了廣泛關(guān)注。目前，ES細胞向生殖細胞分化的研究已經(jīng)取得了一定的成果，而iPS細胞定向誘導(dǎo)分化的研究較少。在本研究中，我們通過體內(nèi)、體外兩種途徑誘導(dǎo)iPS細胞分化，探討其向生殖細胞分化的潛能，希望為研究生殖細胞的發(fā)育提供實驗依據(jù)，為研究不育癥的發(fā)病機制及細胞替代性治療提供新思路。在體實驗中，我們先后將新生小鼠睪丸組織、睪丸細胞移植至裸鼠背部皮下組織，發(fā)現(xiàn)睪丸組織可在異位完成精子發(fā)生過程，移植的睪丸細胞可定植、聚集，形成管狀結(jié)
6、構(gòu)，觀察到了精原細胞在管中的遷移和增殖，新生小鼠睪丸細胞在皮下重構(gòu)形成了生精小管樣結(jié)構(gòu)，從而說明裸鼠皮下組織可以提供精子發(fā)生的微環(huán)境。在此基礎(chǔ)上，我們將小鼠EGPF．iPS4．1細胞與新生小鼠睪丸細胞共同移植至裸鼠皮下，探討iPS細胞向生殖細胞的分化潛能。在移植物中可以檢測到EGFP．iPS4．1來源的、表達生殖細胞特異性標志物的細胞，表明iPS細胞可在此微環(huán)境下向生殖細胞分化。在體外培養(yǎng)體系中，我們在形成類胚體(EB)的基礎(chǔ)上，以維甲酸(RA)等作為誘導(dǎo)分化因子，通過形態(tài)學(xué)觀察、RT．PCR、流式細胞分析術(shù)、免疫熒光等檢測方法研究EGFP．
7、iPS4．1細胞在體外向生殖細胞分化的潛能。RT．PCR結(jié)果顯示，iPS細胞在形成EB的過程中表達一系列雄性生殖系的標志性基因。流式細胞分析術(shù)的結(jié)果顯示，在EB中存在SSEA．1+／integrin．133+的一類細胞，可認為是原始生殖細胞。我們將這一類細胞在含有RA的條件培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐漸有細胞克隆形成，并可擴增傳代。此類細胞克隆呈堿性磷酸酶陽性，表達干細胞多能性標志蛋I芻Oct4和生殖細胞特異性標志蛋白MVH，說明其為生殖干細胞。綜上，我們的研究表明，EGFP．iPS4．1細胞具有與ES細胞相似的特性，可以在體內(nèi)、體外誘導(dǎo)條件下向生殖細胞
8、分化。關(guān)鍵詞誘導(dǎo)多能干細胞精子發(fā)生誘導(dǎo)分化微環(huán)境生精小管異位重構(gòu)生殖干細胞DERlV『ATIONOFGERMCELLSFROMINDUCEDPLURIPOTENTSTEMCELLSABSTRACTInrecentyears，theincidencerateofmaleinfertilityhasbeenincreasingallovertheworld，about50％ofwhichiscausedbyspermatogenesisdysfunction．Basedonitsself-renewalpropertyandmultilineag
9、epotentials，stemcellbecameaverypowerfultechniqueforregenerativemedicine，andaresear
