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《ngal在胃癌中的調(diào)控機(jī)制研究》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文NGAL在胃癌中的調(diào)控機(jī)制研究姓名:汪勝利申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):外科學(xué)指導(dǎo)教師:陶厚權(quán)2012-05-21溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文NGAL在胃癌中的調(diào)控機(jī)制研究中文摘要目的構(gòu)建NGAL真核表達(dá)載體pcDNA3.I+/NGAL+及NGAL反義表達(dá)載體pcDNA3.I+/NGAL一,轉(zhuǎn)染胃癌SGC一7901細(xì)胞,體外實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞內(nèi)NGAL表達(dá)水平改變對SGC一7901細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,進(jìn)一步闡明NGAL在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法1、提取正常胃粘膜組織的RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成
2、cDNA,以此cDNA為PCR模板擴(kuò)增出NGAL基因的ORF序列;PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切、連接反應(yīng)插入DcDNA3.1+表達(dá)載體,從而構(gòu)建NGAL真核表達(dá)載體pcDNA3.I+/NGAL+及NGAL反義表達(dá)載體pcDNA3.I+/NGAL一。2、重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SGC-7901胃癌細(xì)胞,采用熒光定量PCR檢測細(xì)胞中NGAL的相對表達(dá)水平,選取NGAL表達(dá)水平最高的SGC一7901細(xì)胞克隆(SGC一7901/NGAL+)和NGAL表達(dá)水平最低的SGC-7901細(xì)胞克隆(SGC一7901/NGAL一),再經(jīng)M
3、TT試驗(yàn)、遷移試驗(yàn)及侵襲試驗(yàn)觀察NGAL基因?qū)ξ赴┘?xì)胞SGC-7901增殖、遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果1、成功構(gòu)建了NGAL真核表達(dá)載體pcDNA3.I+/NGAL+及NGAL反義表達(dá)載體pcDNA3.I+/NGAL一。2、通過重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染、熒光定量PCR檢測,成功獲得NGAL表達(dá)水平最高的SGC一7901/NGAL+細(xì)胞及表達(dá)水平最低的SGC一7901/NGAL一細(xì)胞。MTT實(shí)驗(yàn)顯示,72h后,SGC-7901/NGAL一細(xì)胞的相對增殖率為SGC一7901/NGAL+的1.33倍。遷移實(shí)驗(yàn)表明
4、,24小時后穿過膜的SGC一7901/NGAL一細(xì)胞數(shù)達(dá)到206.2±24.01個,而穿過膜的$GC一7901/NGAL+細(xì)胞僅143.2±25.2個,SGC一7901/NGAL一細(xì)胞的遷移活性為SGC-7901/NGAL+細(xì)胞的1.44倍。侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,48小時后穿過膜的SGC一7901/NGAL一細(xì)胞數(shù)達(dá)到52.4±15.6個,而穿過膜的SGC一7901/NGAL+僅29.2±9.1個,$GC-7901/NGAL一細(xì)胞的侵襲活性為SGC一790J/NGAL+細(xì)胞的1.79倍。結(jié)論體外實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)N
5、GAL基因可抑制胃癌SGC一7901細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力。關(guān)鍵詞:NGAL;胃癌;增殖:侵襲;遷移溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文StudyofRegulationMechanismofNGALinGastricCancerABSTRACTPurposeToconstructNGALeukaryoticexpressionvectorpcDNA3.1+/NGAL+andNGALantisenseexpressionvectorpcDNA3.1+/NGAL一,andstudytheeffectofNGALo
6、ncellproliferation,invasionandmetastasisofSGC一7901invitro.Methods1,TotalRNAwasextractedfromthenormalgastricmucosaltissue,andconvertedintoeDNAbyRTreaction.NGALORFwasamplifyedbyPCRusingeDNAastemplate.ThePCRproductwasthencutbyrestrictionenzyme,andclonedint
7、opcDNA3.1+vectorinsenceorantisencetoconstructNGALexpressionvectorpeDNA3.1+/NGAL+andNGALantisenseexpressionvectorpcDNA3.1+/NGAL一.2TheRecombinantplasmidDNAweretransfectedintogastriccancercellsSGC一7901.ThenthemRNAlevelofNGALinSGC-7901weredeterminedbySYBRGr
8、eenbasedquantitativePCR.a(chǎn)ndSGC-7901cellcloneswiththehighestNGALlevel(SGC-7901/NGAL+)orlowestNGALlevel(SGC一7901/NGAL一)werechoosed.Then,MTTassay,invitrocellmigrationandinvasionassayswereperformedtoevaluatetheeffectofNGALoncellproli