依達拉奉對缺氧復(fù)氧酸中毒損傷神經(jīng)元的保護作用及機制研究

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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號UDCR741610博士學(xué)位論文學(xué)校代碼10533依達拉奉對缺氧復(fù)氧酸中毒損傷神經(jīng)元的保護作用及機制研究(Thestudyoftheprotectiveeffectsandmechanism—n一-●‘1lo0tEdaravone0nneurona!InlnryinducedbyhypOxla‘，-一一一andacidosis／reoxygenation)作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：昌0指導(dǎo)教師：王桂斌臨床醫(yī)學(xué)神經(jīng)病學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院劉運海教授張寧副教授中南大學(xué)2014年5月

2、萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特另tlDn以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。作者簽名：差叢日期：型竺年三月互日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定：即學(xué)校

3、有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢詫⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者虢塑壟焱、導(dǎo)師簽名日期：世年二月j日日期：塑坐年二月塵日萬方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中文摘要第一章依達拉奉減輕缺氧復(fù)氧酸中毒誘導(dǎo)的神經(jīng)元毒性損傷的作用及分子機制研究摘要目的：1研究依達拉奉對缺氧復(fù)氧酸中毒誘導(dǎo)的神經(jīng)元毒性損傷的作用；2探討依達拉奉對缺氧復(fù)酸中毒損傷的神經(jīng)元保護的分子作用機制。方

4、法：1建立缺氧缺糖復(fù)氧酸中毒(OGD。～R)神經(jīng)元損傷模型，為消除谷氨酸鹽活性及電壓依賴的Caz+通道作用，所有操作中均加入了NMDA和AMPA受體阻滯劑和電壓門控Ca2+通道拮抗劑；2分空白對照組、OGD．A／R組、OGD—A／R加不同濃度依達拉奉組、OGD—A／R加ASICs阻斷劑組，檢測不同時段LDH釋放量、Caspase一3活性、Hoechst33258染色，并進行比較來評價依達拉奉對OGD—A／R損傷神經(jīng)元的保護作用；3選擇適當(dāng)濃度的依達拉奉、ASICla阻滯劑及MEK／ERK阻滯劑分別對不同組別OGD—

5、A／R模型培養(yǎng)中的細胞進行預(yù)處理，用Western．blot檢測ERK、AKT及Bcl一2蛋白表達，RT-PCR檢測BDNF、Bcl一2mRNA表達，ELISIA檢測BDNF蛋白表達，相應(yīng)試劑盒或試萬方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中文摘要劑檢測LDH釋放量(檢測細胞損傷)及Hoechst33258染色(觀察細胞凋亡)。分析比較相應(yīng)數(shù)據(jù)探討依達拉奉在OGD．A／R模型中可能的保護機制。結(jié)果：1成功建立了OGD．A／R模型，并發(fā)現(xiàn)4h和8h即可出現(xiàn)LDH釋放量爆發(fā)性增加。2ASICs阻滯劑PcTX和amiloride預(yù)處理后予OG

6、D．AiR操作4h和8hLDH釋放量顯著減少。與ASICs阻滯劑相對應(yīng)，依達拉奉預(yù)處理繼以O(shè)GD—A／R操作可劑量依賴地減少損傷神經(jīng)元LDH釋放而產(chǎn)生與前者類似但更顯著的保護作用。3與OGD—A／R組相比，依達拉奉預(yù)處理在各時點提高了BDNF和Bcl。2mRNA表達，且在OGD—A／R后8h作用最強；ELISIA檢測提示依達拉奉在同一時間點使BDNF蛋白表達增多；Western．blot則顯示在同一時間點依達拉奉在OGD．A／R后8h上調(diào)了Bcl一2蛋白表達；Caspase一3活性檢測結(jié)果顯示OGD．A／R極大地提

7、高了Caspase一3活性，依達拉奉預(yù)處理可明顯降低這種Caspase．3活性的升高，且具有劑量依賴性。這種保護作用與ASICs阻斷劑使用后相當(dāng)。4與正常對照組比較，OGD—A／R神經(jīng)元p-AKT水平顯著提高，而依達拉奉或PcTX預(yù)處理后OGD．A／R則顯著抑制了AKT磷酸化。5與正常對照組相比，OGD—A／R組或OGD—A／R并PcTX預(yù)處理組可引起p-ERKl／2活性輕度升高，而依達拉奉干預(yù)OGD—A／R后則可引起p-ERKl／2活性明顯升高。這種作用可被MEK／ERK阻斷劑萬方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中文摘要PD98

8、059(10gM)andU0126(5gM)阻斷；6OGD．A／R誘導(dǎo)細胞損傷引起核染色質(zhì)斷裂和LDH釋放增多。而依達拉奉預(yù)處理可在很大程度上防止細胞核形態(tài)變化和減少LDH釋放。然而MEK／ERK阻滯劑PD98059和U0126預(yù)處理幾乎完全抵消了依達拉奉對OGD．A／R損傷神經(jīng)元抗凋亡能力。結(jié)論：1本研究首次發(fā)現(xiàn)依達拉奉能減輕缺氧復(fù)氧酸中毒誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性損