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《成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、.1f盆并乎選瓜第13卷第6期2003年6月成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向`誘導(dǎo)分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)的研究李艷華白慈賢謝超陳琳裴雪濤“軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所,北京100850.摘要體外擴(kuò)增和定向誘導(dǎo)成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)向胰島樣細(xì)胞分化從正常成人骨髓中分離MSC,在含10%胎牛血清的a一MEM培養(yǎng)基中對(duì)其進(jìn)行純化和擴(kuò)增.用bFGF,EGF等因子、誘導(dǎo)MSC向nestin陽(yáng)性的祖細(xì)胞(NIP)分化;用高糖無(wú)血清培養(yǎng)基和日細(xì)胞調(diào)節(jié)素尼克酞胺等.一,,RTPCR法nesnnes,,誘導(dǎo)NIP向胰島樣細(xì)
2、胞分化用檢測(cè)誘導(dǎo)前后ting3了尸F(xiàn)l胰島素胰高血,;雙硫蹤染色鑒定胰島樣的細(xì)胞團(tuán);nesitn糖素基因的表達(dá)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)誘導(dǎo)前后胰島.,,素生長(zhǎng)抑素蛋白的表達(dá);放射免疫分析法檢測(cè)誘導(dǎo)前后細(xì)胞分泌胰島素情況結(jié)胰高血糖素,,果表明MSC經(jīng)第一階段的誘導(dǎo)后可分化成NIP繼續(xù)誘導(dǎo)6d后變圓的細(xì)胞逐漸增多并聚集成團(tuán),雙硫賒染色陽(yáng)性.免疫、、生長(zhǎng)組化實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)兩階段誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)胰島素胰高血糖素抑素等內(nèi)分.放免分析結(jié)果表明誘導(dǎo)的胰島樣細(xì)胞團(tuán)可以分泌胰島素,糖反應(yīng)性較弱.以上泌激素結(jié)果表明成人骨髓間充質(zhì)干
3、細(xì)胞在體外可以被誘導(dǎo)分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán).這將為解決糖尿病細(xì)胞治療所面臨的供者細(xì)胞不足、移植排斥反應(yīng)等問(wèn)題提供.一個(gè)新的方案n關(guān)鍵詞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞enist胰島糖尿病是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)多發(fā)病.臨行培養(yǎng),誘導(dǎo)enstin陽(yáng)性的胰腺干細(xì)胞分化為內(nèi)分床上針對(duì)I型及部分H型糖尿病患者仍采用胰島素泌腺細(xì)胞.可見(jiàn),胚胎干細(xì)胞和胰腺干細(xì)胞均可成注射療法,但每天注射胰島素并不能完全控制血糖為糖尿病細(xì)胞治療的種子細(xì)胞.但是,它們又分別水平,也阻止不了糖尿病腎病、中風(fēng)等并發(fā)癥的發(fā)受到了倫理學(xué)爭(zhēng)論及取材不便等的限制.
4、生.近幾年,經(jīng)肝內(nèi)門(mén)靜脈植入胰島細(xì)胞治療糖尿間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是存在于骨髓中的一群均病取得了一些療效,一些病人在接受胰島細(xì)胞移植質(zhì)性的非造血細(xì)胞.它們易于分離培養(yǎng)擴(kuò)增,遺傳后,能脫離胰島素治療,血糖控制的時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)1背景穩(wěn)定,體內(nèi)植入反應(yīng)較弱,在特定的誘導(dǎo)條件.,胰島細(xì)胞移植仍面臨著兩大,、年以上川遺憾的是下可分化為多種中胚層組織細(xì)胞如骨細(xì)胞軟骨.難題:供者來(lái)源不足、嚴(yán)重的免疫排斥反應(yīng)等.干細(xì)胞5[]、脂肪細(xì)胞、成肌細(xì)胞等MSC能否分化成,細(xì)胞作為一類(lèi)具有自我更新及多向分化潛能的細(xì)胰島樣細(xì)胞呢?2
5、000年wodbury61[等將間充質(zhì).,干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果給了我們很胞已經(jīng)逐漸成為人們尋找胰島細(xì)胞的新資源,.胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性可自發(fā)分化[“〕他們?cè)谡T導(dǎo)分化開(kāi)始的大啟示sh至6d的時(shí)間段.Luy〔3〕,n或經(jīng)誘導(dǎo)分化為胰島細(xì)胞melsk等先將胚胎中檢測(cè)到了estin這一神經(jīng)干細(xì)胞特征性標(biāo)志的干細(xì)胞培養(yǎng)成胚狀體,然后從中挑選nesitn陽(yáng)性細(xì)表達(dá).胞進(jìn)行誘導(dǎo),得到了類(lèi)似胰島的能分泌胰島素的結(jié)胰腺干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞都表達(dá)nestin,這與構(gòu).另外,有學(xué)者’[]對(duì)胰管上皮細(xì)胞及胰
6、島細(xì)胞進(jìn)胰腺與中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有相似的發(fā)育機(jī)制[,]分不2002一22一21收稿,2003一03一03收修改稿*`”,,國(guó)家八六三ZOAAZOSO512O01A2短16151)國(guó)家重大基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(200lCB500計(jì)劃(0296)和北京市科委干細(xì)胞重大專(zhuān)項(xiàng)資助項(xiàng)目..**,一a:Emilpeixt@nicbmiaeen聯(lián)系人f1.魷并乎選展第,3卷第6期2003年6月開(kāi).早期胚胎發(fā)育時(shí)期,胰島細(xì)胞與神經(jīng)細(xì)胞呈現(xiàn).Shcudienr許多相同的表型等8[]認(rèn)為神經(jīng)生長(zhǎng)因子1.2體外誘導(dǎo)Msc向胰島樣細(xì)
7、胞團(tuán)分化可能是胰腺發(fā)育的關(guān)鍵信號(hào).我們根據(jù)胰腺與神經(jīng)取第3代以后的MSC按3x105/mL密度接種系統(tǒng)具有相似發(fā)育機(jī)制的特點(diǎn),探索了誘導(dǎo)成人骨,ngL,于6孔板中每孔加3mL誘導(dǎo)液1(含10/m堿髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島樣細(xì)胞分化的條件為獲得,,性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGFsIGMA)10gn/mL大量胰島細(xì)胞及解決移植排斥反應(yīng)尋找新的出路.,表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGFSIGMA)及2%氏:的1IMDM(IBICO.16d后,材料與方法G)培養(yǎng)液)經(jīng)誘導(dǎo)液培養(yǎng)去除,PBS,舊培養(yǎng)液用緩沖液洗細(xì)胞添加誘導(dǎo)液
8、1.1sc的分離、2(含10ng/mL日細(xì)胞調(diào)節(jié)素(Betaeellulin),10ng/成人M擴(kuò)增培養(yǎng),ng-mL肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)10/mL活化素(A。成人肋骨由非血液系統(tǒng)疾病病人胸外科手術(shù)后獲得.無(wú)菌條件下,擠出肋骨中的骨髓.向骨髓液tivinA,R&DSYSTEMS)和10mmoL/L尼克酞胺a一7,中加入含10%胎牛血清的MEM(GIBICO)充分混(SIGMA)及2%殘的IMDM培養(yǎng)液)繼續(xù)培養(yǎng),,.合1500r/min離心5min棄上
