一株地方株prrsv分離鑒定及gp5基因疫苗研究

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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文一株地方株P(guān)RRSV分離鑒定及GP5基因疫苗研究姓名：曹廣明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：常維山20120615山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要豬繁殖與呼吸綜合征(PorCinerel瑚dl塒ve髓drespimtorys)rIldroIne，PRRS)是一種以引起各種年齡豬呼吸道疾病和母豬繁殖障礙為特征的傳染病，其病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。目前，世界上流行的PRRSV基因型主要有以LV株為代表的歐洲型和以VI也332株為代表的美洲型。自1996年，PRRSV在我國被分離得以來，在我國流行呈蔓延趨

2、勢(shì)。2006年我國部分地區(qū)還暴發(fā)了高致病性豬藍(lán)耳病，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。試驗(yàn)分為兩部分：1、PRRSV．SDDP株的分離鑒定及全基因組序列分析2009年在實(shí)驗(yàn)室臨床病例診斷過程中分離得到一株豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(SDDP株)，參考美洲型代表株(v102332)及近幾年國內(nèi)分離得到的毒株設(shè)計(jì)了13對(duì)引物對(duì)其全基因組進(jìn)行了克隆測(cè)序、系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。結(jié)果顯示，SDDP．PⅪ峪V株屬美洲型PI派SV，與高致病性P硒塔V代表株SX．1、Ⅸ143、JXAl的同源性在98．7-99．7％，非結(jié)構(gòu)基因NSP2的變異性最大，與美洲代表VI匕332存在90個(gè)核苷酸的缺失(位于NSP2

3、核酸序列的1540．1542、1594．1680)，這與2006年來分離得到的毒株相似。結(jié)構(gòu)基因OI心6、7的相對(duì)保守。SDDP分離株與國內(nèi)其他分離株相比呈現(xiàn)出一定的新特性，為高致病性藍(lán)耳病的防治提供理論依據(jù)。2．不同分子佐劑對(duì)P砌峪V-GP5核酸疫苗免疫效果影響的研究基因疫苗主要是由真核表達(dá)載體和保護(hù)性抗原基因構(gòu)成的，與傳統(tǒng)疫苗相比較，具有設(shè)計(jì)靈活、安全性高、性質(zhì)穩(wěn)定、成本低、同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫等優(yōu)點(diǎn)。然而核酸疫苗同時(shí)存在抗體產(chǎn)生慢且水平低的問題，需要加入有效的佐劑才能克服這些缺點(diǎn)，國內(nèi)外學(xué)者一直在探索進(jìn)一步提高基因免疫效果的方法，其中在基因免疫表達(dá)載體中引入調(diào)節(jié)分子是

4、其中重要的措施之一。試驗(yàn)中選取補(bǔ)體C3d、干擾素誘導(dǎo)蛋白10(m．10)，法氏囊三肽(BS)，胸腺五肽(TP)作為分子佐劑與PRRSV的保護(hù)性抗原GP5構(gòu)建到表達(dá)載體pcDNA3．1中，大量提取重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，經(jīng)間接免疫熒光證明重組質(zhì)粒能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。重組質(zhì)粒免疫小鼠，通過ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠體內(nèi)抗體、IL．4和IFN．丫的水平，結(jié)果顯示，抗體效價(jià)、IL．4和IFN吖含量均比對(duì)照組高，在分子佐劑組中以pcDNA3．1．IP．10．GP5組的效果最好，與空白對(duì)照及PCDNA3．1．GP5組比較差異均顯著(P

5、因疫苗研究?？纱碳C(jī)體產(chǎn)生較高的體液免疫和細(xì)胞免疫水平，IP．10分子佐劑能顯著增強(qiáng)PI汛SVGP5基因的免疫效果。關(guān)鍵詞：PI汛sV，全基因，GP5核酸疫苗，分子佐劑，免疫效果II山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文————————————————————————————————————————————————一IsolationandIndentificationofaLocalStrainofPRRSVandResearchofGP5GenicVaccinesAbstractPorCinereproductiveandrespira【呻syndrome(PRRS)isacontagio

6、llSdiseaSccausedbyporcine掣ductiVeandrespi咖驢dr0眥Vinls(PRRSV)．PRRSmailllyc棚edreproductivedisorderandporcinerespiratoDr跚婦eatVariet)rofages．TheVimsisclassifiedinto2t)，pes，勺lrpeI(Europ鋤)andt)，：peII(NormAm耐can)based0ntllegenetic鋤d砌igenicdi行erences鋤ong恤PI汛SVStmi硒．hll996，Gu0Baoqingfirstisola蜘aPI汛SVs臼

7、面n舶mabomdf．etusesandVeri舶d也e嘶denceofPIU峪Vinourco啷Atthepresent，PRRShaSprevailedintl圮mainwodilwhnepig-raisingcouI】向yanddistrictsandcausedpig—raisingla唱eeconomiclossesinⅡ圮wodd．TllissubjeCtcallbediVidednot量ll優(yōu)parts：1Isolationandsequence觚alysisofP