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《甜瓜果實番茄紅素-β環(huán)化酶基因的克隆、表達與遺傳轉化研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、山東農業(yè)大學碩士學位論文甜瓜果實番茄紅素--β環(huán)化酶基因的克隆、表達與遺傳轉化研究姓名：郝慧申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導教師：于喜艷20120611山東農業(yè)大學碩士學位論文摘要甜瓜(CucumismelonL．)是世界上重要的園藝作物之一，果實含有大量的類胡蘿卜素，其中B．胡蘿卜素含量最為豐富。醫(yī)學研究表明，類胡蘿b素具有增強人體免疫力、防止心血管疾病和癌癥等方面的重要作用。番茄紅素D環(huán)化酶(LCYB)是甜瓜果實D．胡蘿卜素合成中的關鍵限速酶。本論文通過高效液相色譜法(HPLC)測定了不同基因型甜瓜果實發(fā)育過程中B．胡蘿卜素的含量，克隆了甜瓜果實Lcyb基因全長eDNA，并進行了
2、表達特性分析和遺傳轉化研究，以期為利用現(xiàn)代生物技術手段進行甜瓜品質改良奠定基礎。主要研究結果如下：1．利用HPLC測定了兩個不同基因型的甜瓜品種，即光滑黃皮白色果肉M01—3和綠色網(wǎng)紋橙色果肉‘Homoka’果實發(fā)育過程中p．胡蘿卜素含量，結果表明，p．胡蘿b素含量在兩個品種果實發(fā)育過程中的變化趨勢一致，果實發(fā)育前期含量很低，接近成熟時含量達到最大值，成熟后含量又下降。兩個品種果實中B．胡蘿卜素含量差別很大，‘Homoka’在果實成熟前期B．胡蘿卜素含量最高，是M01．3的十幾倍。2．根據(jù)GeneBank中登記的其它植物的Leyb基因保守序列設計兼并引物，利用RT-PCR及3’、5'R
3、ACE技術從M01．3甜瓜果實中克隆到Leyb基因，該基因全長1871bp，編碼504個氨基酸，在GenBank中登記號為GU457407。3．利用RealTimeRT-PCR進行了Lcyb基因在甜瓜不同器官和果實發(fā)育階段的表達特性分析，結果表明，Lcyb基因在M01．3和‘Homoka’根、莖、葉、花和果實中都有表達，在M01．3花中的表達量最高，在‘Homoka’成熟果實中的表達量最高。Lcyb基因在果實中的表達量隨著果實的發(fā)育逐漸增加，M01．3在花后25天達到最大值，隨后緩慢下降，‘Homoka’在花后45天達到最大值，果實成熟后又迅速下降。4．構建了甜瓜Lcyb基因的正、反義
4、表達載體，并利用農桿菌介導法對甜瓜進行了遺傳轉化，成功獲得Kan抗性的轉化苗。關鍵詞：甜瓜；13一胡蘿l、素；番茄紅素13環(huán)化酶；克??；遺傳轉化甜瓜果實番茄紅素-p環(huán)化酶基因的克隆、表達與遺傳轉化研究ABSTRACTMelon(CucumismeloL．)isoneofthemostimportanthorticulturalcropsintheworld，itcontainsalotofearotenoids，especiallylB．-earotene．Medicalstudieshaveshownthatcarotenoidshaveimportantrolesinenhanci
5、nghumanimmunity,preventingcardiovasculardiseaseandcaneer．Leybisthekeyenzymeinthemeloncarotenoidbiosynthesispathway,andplaysakeyroleinthesynthesisofearotenoidsinmelon．Inthisstudy,wemeasuredIB-carotenecontentatdifferentdevelopmentalstagesofmelonfruitbyHPLC．WeclonedthefulllengthofmelonLcybeDNA．Weal
6、soanalyzedtheLcybexpressioncharacteristicanditsgenetictransformationtomelon．Themainresultsareasfollows：(1)IB-carotenecontentintwodifferentgenotypesmuskmelonfruitatdifferentdevelopmentstagesweremeasuredbyHPLC．Theresultsshowedthatinthefruitdevelopmentoftwogenotypes(M01-3，Homoka)，thereareverylittle
7、13-carotenecontentinearlymelonfruitdevelopmentandIB-carotenecontentrapidlyincreasedinnearlymaturefruitandfollowedbydeclinedaftermature．OrangefleshHomokahadthehighest13-carotenecontentinnearlymaturefruitandsignificantlyhigher
