資源描述：
《淋巴細(xì)胞活化基因3(lag3)表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)專(zhuān)業(yè)病原生物學(xué)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文淋巴細(xì)胞活化基因3(1a93)表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究Theregulatorymechanismoflymphocyte—activationgene3(1a93)expression碩士研究生郝書(shū)民導(dǎo)師徐建青研究員導(dǎo)師組成員徐建青研究員張曉燕研究員仇超助理研究員二零一四年四月于復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院本課題承國(guó)家艾滋病與病毒性肝炎等重大傳染病防治重大專(zhuān)項(xiàng)(2012ZXl0006—003—010)的資助萬(wàn)方數(shù)據(jù)目錄中文摘要??????????????????????1Abstract．?．．?????????????????????3前言
2、????????????????????????5正文??????????????．?．．????????71．材料與方法????????????????????72．結(jié)果??????????????????????18討論???????．?????．?????????????．27結(jié)論??????????????????????????29創(chuàng)新性?????????????????????????29參考文獻(xiàn)????????????????????????30附錄一英文縮略詞???????????????????33致謝????????????????????????34萬(wàn)
3、方數(shù)據(jù)中文摘要淋巴細(xì)胞活化基因3(1ymphocyte—activationgene3，la93)，又稱(chēng)CD223，是屬于免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuperfamily，IgSF)的細(xì)胞膜蛋白，其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與CD4分子非常相似，基因位置鄰近CD4。早期研究顯示，LAG3在人體內(nèi)的表達(dá)局限于外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)中的少數(shù)亞群上，如活化的T淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞等。研究表明LAG3對(duì)T細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)有重要作用，且與多種疾病狀態(tài)下的免疫失調(diào)相關(guān)，但la93基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制依然不明
4、確。本文利用LAG3表達(dá)水平有差異的3個(gè)T細(xì)胞系(CEM，JurkatE6—1，JurkatZM細(xì)胞系)，對(duì)T細(xì)胞中l(wèi)a93基因表達(dá)調(diào)控的部分機(jī)制進(jìn)行了研究，并發(fā)現(xiàn)位于轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)中的CpG島岸(CpGislandshore)的DNA甲基化將抑制la93基因的轉(zhuǎn)錄。首先，我們從mRNA和蛋白水平對(duì)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有T細(xì)胞系的LAG3表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)3個(gè)細(xì)胞系中LAG3表達(dá)有差異且受到轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控。通過(guò)比對(duì)人與老鼠的基因組序列，鑒定到la93啟動(dòng)子中存在兩個(gè)潛在的保守調(diào)控區(qū)CRA和CRB(conservedregionA&B)。利用DNaseI高敏感位點(diǎn)的分析方法，我們發(fā)現(xiàn)在LAG
5、3+的JurkatE6．1細(xì)胞亞群中，CRA和CRB對(duì)DNaseI的處理敏感。將包含CRA和CRB的la93基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(transcriptionstartsite，TSS)上游片段擴(kuò)增并構(gòu)建報(bào)告質(zhì)粒p．basic，發(fā)現(xiàn)該區(qū)段具有較高啟動(dòng)子活性。進(jìn)一步，通過(guò)截?cái)鄦?dòng)子發(fā)現(xiàn)CRB是該啟動(dòng)子區(qū)段中的核心序列，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CRB在LAG3表達(dá)水平極低的CEM和JurkatZM細(xì)胞中亦具有高啟動(dòng)活性，提示我們這兩種細(xì)胞內(nèi)源的LAG3表達(dá)受到了表觀(guān)遺傳調(diào)控。接下來(lái)，我們利用Methprimer軟件預(yù)測(cè)到了一個(gè)位于轉(zhuǎn)錄區(qū)域的CpG島IS及其上游的位于CRB區(qū)的CpG島岸，亞硫氰酸鹽測(cè)
6、序PCR(bisulfitesequencingPCR，BSP)檢測(cè)表明：IS處于穩(wěn)定的高度甲基化水平，而CpG島岸的DNA甲基化水平與LAG3在3個(gè)T細(xì)胞系上的表達(dá)水平負(fù)相關(guān)。利用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶M．SssI將CRB體外甲基化可以顯著降低其啟動(dòng)子活性，表明CRB甲基化對(duì)la93基因轉(zhuǎn)錄具有抑制作用。此外，使用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-dc處理LAG3表達(dá)水平低的CEM和JurkatZM細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)兩者的LAG3mRNA和蛋白表達(dá)水平均得到一定程度的提升，同時(shí)觀(guān)察到CRB甲基化水平的顯著降低。為了確定CRB甲基化對(duì)人原代T細(xì)胞中l(wèi)a93基因的調(diào)控作用，我們檢測(cè)了原代T
7、細(xì)胞的CRB甲基化，發(fā)現(xiàn)：相較于作為L(zhǎng)AG3表達(dá)陰性對(duì)照的B淋巴細(xì)胞，原代CD8+T淋巴細(xì)胞的各記憶亞群上CRB的甲基化水平均低。綜上，我們的數(shù)據(jù)表明：發(fā)生在CpG島岸上的DNA甲基化對(duì)于人T細(xì)胞萬(wàn)方數(shù)據(jù)系中l(wèi)a93基因轉(zhuǎn)錄而言是一種重要的表觀(guān)遺傳調(diào)節(jié)機(jī)制，而CRB的低甲基化水平可能將CD8+T細(xì)胞維持在適于LAG3快速表達(dá)的狀態(tài)以應(yīng)對(duì)活化信號(hào)并迅速終止CD8+T免疫應(yīng)答。關(guān)鍵詞：la93表達(dá)調(diào)控，DNA甲基化，亞硫氰酸鹽測(cè)序，DNaseI高敏感位點(diǎn)，CD8+T細(xì)胞中圖分類(lèi)號(hào)：R373．22萬(wàn)方數(shù)據(jù)Abstract
