放線菌769對水稻抗稻瘟病的誘導抗性研究

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1、吉林農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文放線菌769對水稻抗稻瘟病的誘導抗性研究姓名:隋麗申請學位級別:碩士專業(yè):生物物理學指導教師:陳光;李啟云20080601放線菌769對水稻抗稻瘟病的誘導抗性研究摘要本研究所使用的供試菌種為放線菌769(Streptomycesahygroscopicusgongzhulingensis91.vat.Ruan.etZhang.1974),該菌種于1974年從吉林省農(nóng)業(yè)科學院溫室土壤中分離出來,是一種對多種病原菌有抑制作用的拮抗鏈霉菌。本研究探討了769菌株在防治水稻稻瘟病方面的應用情況,對該菌種的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化,確定了最佳發(fā)酵條件下769菌株

2、發(fā)酵液的抑菌譜,測定了最佳發(fā)酵條件下發(fā)酵液的穩(wěn)定性,并用不同濃度的發(fā)酵液處理水稻幼苗,在不同的時間對水稻秧苗中三種主要防御酶(過氧化氫酶,CAT;過氧化物酶,POD;苯丙氨酸解氨酶,PAL)活性變化規(guī)律進行檢測。本研究拓展了769菌種的應用空間,為今后該拮抗放線菌的開發(fā)和應用提供一定理論依據(jù)和技術支持。本文對影響菌株769抑菌活性的發(fā)酵培養(yǎng)基組分進行了優(yōu)化,通過對放線菌發(fā)酵培養(yǎng)常用的六種發(fā)酵培養(yǎng)基進行了篩選,確定了基礎培養(yǎng)基,在此基礎上對碳氮源和無機鹽進行了優(yōu)化,通過正交試驗確定了菌株769的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:黃豆豆粉2.0%,玉米粉1.50%,蔗糖1.O%,牛肉膏0.60%,碳酸鈣O.3

3、0%,硫酸銨0.50%,氯化鈉0.30%,硫酸鎂0.10%,磷酸二氫鉀O.02%,硫酸亞鐵0.01%。通過對最佳發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值、接種量、搖瓶裝液量、搖床轉速等發(fā)酵條件進行正交試驗設計,確定搖瓶最佳發(fā)酵條件組合為:種子液菌齡28h,接種量4%,發(fā)酵時間72h,培養(yǎng)基初始pH6.72,培養(yǎng)基裝量70ml/250ml三角瓶,發(fā)酵溫度28℃,搖床轉速180rmin~。最佳發(fā)酵條件的抑菌率達到87.75%,比初篩結果高出20%。通過分析菌株769發(fā)酵液抑菌譜,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液對抑制植物病原菌具有廣譜性,對稻瘟病菌、番茄炭疽、構巢曲霉、番茄葉霉、番茄灰霉、玉米穗腐、小麥赤霉病原菌等有不同的抑制作用。對76

4、9菌株發(fā)酵液的酸堿穩(wěn)定性研究表明,發(fā)酵液在酸堿環(huán)境中穩(wěn)定性好,只有在強酸和強堿環(huán)境中活性有所下降;熱穩(wěn)定性研究表明,在100℃的環(huán)境中隨著時間的延長抑菌活性不斷下降,說明它的熱穩(wěn)定性在高溫下不是很好,但在其它溫度下其活性基本沒有改變。通過測定發(fā)酵液對水稻幼苗主要防御酶活性結果顯示,原液、稀釋10倍、稀釋20倍的發(fā)酵液處理水稻秧苗,以發(fā)酵液原液的作用效果最為顯著,處理后水稻體內(nèi)各種防御酶比對照均有明顯變化,使水稻獲得系統(tǒng)抗病性。769菌株發(fā)酵液處理水稻葉片可抑制過氧化氫酶(CAT)的活性,提高過氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。表明發(fā)酵液可誘導和增強POD、PAL的表達和過氧化氫

5、含量的提高,從而增強植物的防御反應。關鍵詞:放線菌769,發(fā)酵條件,稻瘟病,防御酶IIInducedresistancestudyofActinomycetes769againstMagnaporthegriseaAbstractStrain769(Streptomycesahygroscop&usgongzhulingensisrLvar.Ruan.etZhang.1974),whichwasisolatedfromasoilsamplein1974,WasaneffectiveantagonisticStreptomycessp.ondifferentplantpathogens.Wedi

6、scussedtheapplicationofswain769inriceblastcontr01.Fermentationmediumandfermentationconditionswereoptimizedinflask.Theinhibitionspectrumofstrain769andthestabilityoffermentationproductionwerestudied.Thedefenseenzymes(Catalase,CAT;Peroxidase,POD;Phenylalanineammonialyase,PAL)activityWasanalyzedofthetre

7、atedriceleaveswithdifferentconcentrationof769fermentationproductionanddifferentgrowthperiods.Thestudynotonlydevelopsthenewareasofstrain769butalsoprovidescertaintheorybasisandthetechnicalsupportforthis

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