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1、西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文核桃內(nèi)生真菌G8次生代謝產(chǎn)物及其生物活性的研究姓名：徐文濤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：林產(chǎn)化學(xué)加工工程指導(dǎo)教師：翟梅枝20080501核桃內(nèi)生真菌G8次生代謝產(chǎn)物及其生物活性的研究摘要本文從核桃根中篩選出一株真菌G8，對G8進行了內(nèi)生真菌確認(rèn)，證明G8是核桃內(nèi)生真菌。明確了核桃內(nèi)生真菌分離方法的可行性。并根據(jù)G8的菌株形態(tài)及顯微結(jié)構(gòu)特征，初步鑒定為葡萄殼小圓孢菌。以8種病原真菌和3種植物種子為活性實驗材料，對內(nèi)生真菌G8的發(fā)酵產(chǎn)物進行活性測定。結(jié)果表明：內(nèi)生真菌發(fā)酵液對8個病原真菌都有
2、一定的抑制作用，其中對小麥赤霉和玉米大斑病原真菌的抑制率大于50％，說明發(fā)酵液中含有抑制病原真菌的活性物質(zhì)。對3種植物種子進行化感試驗說明：G8菌株發(fā)酵液對3種植物生長有抑制作用，其中，發(fā)酵液對芽的抑制率大小為：油菜>綠豆>蘿卜；發(fā)酵液對根的抑制率大小為：綠豆>蘿卜>油菜，發(fā)酵液對測試植物綠豆的抑制活性總體較強。以此把內(nèi)生真菌G8作為實驗菌株。對G8進行大量發(fā)酵，發(fā)酵液各萃取相進行抑菌活性，以28種病原真菌和5種細(xì)菌作為供試菌株進行活性試驗，結(jié)果表明：(1)發(fā)酵液的提取物對28種植物病原真菌均有不同程度的抑制
3、作用，各萃取相粗提物在40mg．mL。1時，乙酸乙酯萃取物的抑制效果最好，其次為正丁醇萃取物，萃余物最弱，但正丁醇萃取物對水稻紋枯、楊樹潰瘍、小麥雪腐病原菌的抑制率大于其它兩相萃取物。(2)不同濃度的乙酸乙酯萃取物對11種病原真菌進行活性實驗，結(jié)果表明：對蘋果輪紋、蘋果腐爛、小麥根腐、稻瘟4種病原菌的抑制率為100％，不同濃度的萃取物對苜蓿炭疽、小麥赤霉、番茄早疫、蘋果炭疽和玉米小斑5種病原菌的抑制率表現(xiàn)出極顯著差異，對玉米大斑和辣椒疫霉2種病原菌的抑制率無顯著差異。(3)乙酸乙酯萃取物對5種細(xì)菌的抑菌試驗表
4、明，對蠟狀芽孢桿菌和馬鈴薯芽孢桿菌2種細(xì)菌表現(xiàn)為抗藥性，但不同濃度處理間差異不顯著。以(2)的試驗結(jié)果確定了菌株次生代謝物分離的部位，活性跟蹤的菌種和濃度。G8發(fā)酵液乙酸乙脂萃取得31．29樣品，在活性跟蹤的指導(dǎo)下，采用硅膠柱層析，sephadeXLH．20柱層析和重結(jié)晶等手段分離得到兩種化合物。通過理化性質(zhì)分析和NMR分析，最終確定了其中1個化合物為膽甾醇，另外一個尚未進一步鑒定。關(guān)鍵詞：核桃內(nèi)生真菌；液體發(fā)酵；抑菌活性；膽甾醇THESECONDARYMETABoLITESANDBIOLoGICALACTI
5、VITYoFENDOPHYTICFUNGIG8FRoMWALNUTABSTRACTAn如ngusG8waSscreenIedf．romⅡler00tofwalrIut，廿leidemificationexperimentWhetllerthe如n母lsisendophytehaVebeendone，t11eresultshowedthattlle如n目lsw嬲erldophyte，andmememodseparatillgendophytef如mwalnutisfeaSible．TheworkwIlichid
6、emifiedtlleendophnella_Vebeencarriedaccordingt0tlleshapeaIldtlleckmlcterofnlicro-struc骶，andconfi珊edit嬲(0門fD咖礦f“聊．’，塒’，DMMitu：阻initially．The8stainsofpatllogen鋤ld3玉【indsofpl枷w硒used嬲thematerialst0testtlleactiVit)rofmeendophyticfennentation，resultsho、Ⅳedthattll
7、efemlentationofⅡleendophyteG8hadsomeinhabitationt0the8strains，鋤dtherateofiIlhabitationwasover50％t0the脅砌伽歷D印D，f“所m愆fc“聊jk船鋤dF協(xié)刃f“肌g陽歷仂P甜姍l，it砌icatet11attllefe肌entationhaVesomecompoundstoreducenlepathogen；thef．e咖entationllade丘Iectontlle3kindsp1鋤t，tlleizlhabit
8、edrateoftIlebudw嬲r印e>nmng>radis，觚dtheim【abitedrateofrootw嬲mung>radis>rape，mei11k山itedrateofmungw嬲llighestofa11．sotheendophyteG8w嬲screenedaSthematerialtosmdy．G8waSfementedl鶘ely．111eex慨tofitsfementation、
