小麥重要農(nóng)藝性狀qtl的定位

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1、2小麥農(nóng)藝性狀QTL的定位片段長度的差異。這一技術(shù)用放射性同位素或非放射性物質(zhì)標(biāo)。i已DNA片段作為同源序列探針，與轉(zhuǎn)移于支持膜上的經(jīng)特定限制性內(nèi)切酶消化的基因組總DNA雜交，通過放射性自顯影來顯示酶切片段的大小，檢測生物個(gè)體之間的差異。此技術(shù)首先在人類基因組作圖中發(fā)展起來(Botstein等，1980)，1，以后被廣泛用于植物基因組作圖。各種作物包括小麥及其近緣植物的遺傳作圖的初期，主要是利用RFLP標(biāo)記繪制遺傳圖譜。RFLP標(biāo)記具有共顯性特點(diǎn)，可以區(qū)別基因型純合與雜合，能夠提供單個(gè)位點(diǎn)上較完整的資料。它主

2、要應(yīng)用于各種作物遺傳連鎖圖的繪制和目標(biāo)基因的標(biāo)記。但由于RFLP標(biāo)記對DNA需要量較大(5．10Lg)，所需儀器設(shè)備較多，成本高，技術(shù)較為復(fù)雜，所以應(yīng)用受到了一定程度的限制(王長有等，2000)H3。1．1．1．2RAPD標(biāo)記隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RandomAmplifiedPolymorphismDNA，RAPD)，采用短的隨機(jī)核苷酸序列引物(一般104"核苷酸左右)通過專門的PCR反應(yīng)對基因組擴(kuò)增而產(chǎn)生的多態(tài)性片段(Williamsetal，1990)島j。小麥基因組較大(1．6X10Ⅷbp)而且染色體

3、之間具部分同源性，用隨機(jī)引物擴(kuò)增時(shí)易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。而且用RAPD技術(shù)所得的標(biāo)記多來源于基因組的重復(fù)DNA序列，限制了將該標(biāo)記轉(zhuǎn)化為RFLP探針的可能，因而無法用RAPD技術(shù)來構(gòu)建小麥的連鎖遺傳圖(Devosetal，1992a)疆1。RAPD標(biāo)記在基因定位(Seoetal，2001)"!、外源染色體片段檢測(Kingetal，1993)

4、8j、近緣種屬的起源與進(jìn)化和品種J目的遺傳多樣性(Joshietal，1993)””等方面得到廣泛的應(yīng)用。另外，該方法與RFLP卡B比，有以下優(yōu)點(diǎn)：程序相對簡單，完成1個(gè)

5、過程費(fèi)時(shí)少，靈敏性高。但RAPD標(biāo)記是顯性標(biāo)記，不能區(qū)分雜合型和純合型并且重復(fù)性差。1，1．1，3AFLP標(biāo)記AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism，AFLP)即擴(kuò)增片段長度多態(tài)性，是由荷蘭科學(xué)家Zabeau$口Vos等(1995)‘”發(fā)展起來的分子標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合了RFLP和RAPD技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)。方法是將基因組DNA用兩個(gè)不同的內(nèi)切酶切割，然后分別與這兩個(gè)酶切的粘末端互補(bǔ)的轉(zhuǎn)接頭連接，再用一個(gè)轉(zhuǎn)接頭的共同弓l物和另一個(gè)l-3bp的隨機(jī)引物一起進(jìn)行PCR擴(kuò)增。由于不同材料

6、的DNA酶切片段存在差異，因而產(chǎn)生了擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性。該標(biāo)記多態(tài)性高，重復(fù)性好，可以檢測出任何DNA之I．自J的多念性，被廣泛用于遺傳多樣性、遺傳圖譜構(gòu)建和基因定位等研究。但是AFLP標(biāo)記只是表示DNA片段長度的多態(tài)性，對于有些長度相同而DNA序列不同的AFLP片段在聚丙烯酰胺凝膠中則無法分離，難以準(zhǔn)確反映基因型的多念性(王立新等·2007)?‘。內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文31．1．1．4SSR標(biāo)記微衛(wèi)星(Microsatellites)或簡單序列重復(fù)(SSR)是以1．6個(gè)堿基為基本單元的串聯(lián)重復(fù)序列(Lit

7、t，1989)n21，由于這些序列在真核生物的基因組中廣泛存在，加上串聯(lián)重復(fù)的數(shù)目是可變的，故SSR標(biāo)記呈現(xiàn)出高度的多念性。SSR標(biāo)記呈共顯性遺傳：位點(diǎn)數(shù)量多，標(biāo)記所顯示的帶型簡單，記錄的條帶一致客觀、明確；DNA樣品的用量少，質(zhì)量要求不高，以及實(shí)驗(yàn)程序簡單等優(yōu)點(diǎn)。因此，SSR標(biāo)記已經(jīng)成為目前應(yīng)用最廣泛的小麥分子標(biāo)記。小麥的基因組存在很多重復(fù)序列，它含有A、B和D三個(gè)基因組，構(gòu)成一個(gè)龐大和復(fù)雜的總基因組。每單倍體基因組含有約16000Mbp，其中80％多為重復(fù)DNA。因此在小麥基因組檢測中使用簡單重復(fù)序列(S

8、SR)更有效。目前有很多可利用的微衛(wèi)星標(biāo)記可用作小麥基因組的QTL作圖和定位(R6der等，1998；Pestsova等，2000：Somers等，2004)n31鰣。Huang等(2003，2004)¨¨”使用微衛(wèi)星標(biāo)記和高世代回交方法從野生種發(fā)掘一些重要的農(nóng)藝性狀QTL并轉(zhuǎn)移到栽培種中。Prasad等(2003)¨刖使用微衛(wèi)星標(biāo)記檢測出了小麥籽粒蛋白的QTL。Li等(2006a)¨"使用70個(gè)SSR標(biāo)記檢測親本周8425B、中國春和抗感池，并對F2和F3群體進(jìn)行分析，在周8425B的7BL染色體上發(fā)現(xiàn)一個(gè)

9、顯性抗條銹病基因，暫定名為YrZH84。Li等(2006b)乜們則利用819對SSR標(biāo)記在川麥42的1B染色體上檢測到一個(gè)顯性抗條銹病基因，定名為yrC刖2。Medini等(2005)澀”利用SSR和AFLP兩種標(biāo)記分析突尼斯硬粒小麥和7個(gè)野生品種的差異。1．1．1。5EST—SSR標(biāo)記EST(ExpressedSequenceTag，EST)，即表達(dá)序列標(biāo)簽，首先由美國科學(xué)家Breaner在人類基