資源描述：
《神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體trka與胞內(nèi)信號(hào)分子mint2相互作用的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體TrkA與胞內(nèi)信號(hào)分子Mint2相互作用的研究姓名：張騏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：何成20040501苧二蘭墮查蘭堡!．蘭堡笙苧!蔓皇絲曼I英文縮寫Muncl8interactingproteinsMuncl8相互作用蛋白PDZdomainPostsynapticdensity一95／DiscsPDZ結(jié)構(gòu)域large／Zonaoccludens一1PTBdomainPhosphotyrosinebindingdomain磷酸化酪氨酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域PCRcDNAbpAmDAPSDSTEMEDPAGEGSTI
2、PTG丁hrPTKNGFTrkAIPIBPolyasechainractionComplementaryDNABasepairAmpicillinAmmoniumPersulfateSodiumDodecylSulfate聚合酶鏈反應(yīng)互補(bǔ)DNA堿基對(duì)氨芐青霉素過(guò)硫酸銨十二烷基硫酸鈉N，N，N，N—Tetramethylethylenediamine四甲基乙二酸Rotateperminutes每分鐘轉(zhuǎn)速Polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝膠電泳Glutathions-transformase谷胱甘肽．S轉(zhuǎn)移酶Isopro
3、pylB—D—Thiogalactoside異丙基一硫代一B—D-半乳糖苷arginine精氨酸asparagmetvmslneprolmemethionineG1utaminethreonineProteinTyrosineKinase天冬酰胺酪氨酸脯氨酸甲硫氨酸谷氨酰胺蘇氨酸酪氨酸蚩白激酶Nevergrowthfactor神經(jīng)生長(zhǎng)因子NevergrowthfactorreceptorTrkAimmunoprecipttationimmunoblotting神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體免疫共沉淀免疫印跡鼬m¨盼㈨∞；((((她蛔研№曲第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文11中英文
4、摘要神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體TrkA與胞內(nèi)信號(hào)分子Mint2相互作用的研究摘要NGF是最早發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，它的作用除促進(jìn)發(fā)育中的交感、感覺(jué)神經(jīng)元分化、成熟、維持成年期的生存等功能外，還可阻止成年神經(jīng)損傷后死I：：。Tr】姐是NGF的高親和力受體，分子量為140kDa，膜內(nèi)域具有酪氨酸蛋白激酶活性。TrkA在NGF作用下發(fā)生二聚化，使胞內(nèi)域中酪氨酸激酶區(qū)激活，從而使TH出中酪氨酸自磷酸化，并進(jìn)一步激活胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而實(shí)現(xiàn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)信號(hào)傳遞。本實(shí)驗(yàn)室以往研究顯示，運(yùn)用酵母雙雜交方法篩選人腦LexAcDNA文庫(kù)，發(fā)現(xiàn)胞內(nèi)信號(hào)分子Mint2可能與神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體Tr
5、kA的胞內(nèi)域相互作用。信號(hào)分子Mint2屬于Mint胞漿蛋白家族，目前Mint家族已有三個(gè)成員，即Mind、2、3。Mintl、2僅在神經(jīng)組織中表達(dá)，Mint3分布廣泛，且Mint家族成員均含有一個(gè)中央保守的PTB功能域和C端兩個(gè)PDZ功能域。文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)Mint蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)時(shí)，它們可以增加細(xì)胞內(nèi)[LAPP蛋白的半衰期及其表達(dá)水平，并可以改變p．APP的代謝進(jìn)程。p．APP可經(jīng)B一和v．分泌酶蛋白水解代謝后形成淀粉樣蛋白Ap，AD在老年斑中大量積聚是阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)發(fā)病機(jī)制淀粉假說(shuō)的核心。因此，進(jìn)一步
6、明確TrkA受體與信號(hào)分子Mint2的相互作用，對(duì)于深入認(rèn)識(shí)Mim2分子的生物學(xué)功能，以及深入了解老年性癡呆等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制和尋求新的防治手段具有重要意義。本研究主要結(jié)果如下：j@TrkA胞內(nèi)域與LexA蛋白融合構(gòu)建成的誘餌蛋白質(zhì)粒pGilda．TrkA“，與構(gòu)建成的Mjnt2全長(zhǎng)及Mint2各結(jié)構(gòu)域-AD融合蛋白質(zhì)粒pB42AD-Mint2、pB42AD—Mira2一N、pB42AD—Mint2-PTB、pB42AD—Mint2-PDZl、pB42AD—Mint2一PDZ2分別共轉(zhuǎn)化HLY819。共轉(zhuǎn)化子的B一半乳糖苷酶活力檢測(cè)以及SD／GalU
7、ra"His‘T邛一Leu。平板生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在酵母eeMira2一PTB象Mint2全長(zhǎng)一樣-與TrkAK有較強(qiáng)的相互作用；Mint2．PDZt、Mint2一PDZ2與TrkAK的結(jié)合較微弱；而Mint2．N與第二軍醫(yī)人學(xué)壩十學(xué)位論文中英文摘要TrkA”未見(jiàn)結(jié)合。將Mint2一N段以／3lMint2一PTB、Mint2一PDZl、Mint2一PDZ2結(jié)構(gòu)域啞克隆到pGEX-4T3質(zhì)粒中，構(gòu)建成Mint2。PTB、Mint2．PDZl、Mint2．PDZ2結(jié)構(gòu)域以及Mint2-N段的GST融合蛋白的表達(dá)質(zhì)粒，利用大腸桿菌BL一21實(shí)現(xiàn)融合蛋白的原核表達(dá)，利用
8、交聯(lián)葡聚糖親和層析法純化，得到TMint2各個(gè)功能域
