不同來(lái)源5-氨基乙酰丙酸合成酶的表達(dá)、酶學(xué)性質(zhì)研究及其應(yīng)用

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1、⑧論文作者簽名:猛譴』塹指導(dǎo)教師簽名:論文評(píng)閱人1:評(píng)閱人2:評(píng)閱人3:評(píng)閱人4:評(píng)閱人5:答辯委員會(huì)主席:委員1:委員2:委員3:委員4:委員5:Author’Ssignature:Supervisor’Ssignature:Thesisreviewer1:Thesisreviewer2:Thesisreviewer3:Thesisreviewer4.Thesisreviewer5:Chair:(Committeeoforaldefence)Committeeman1:Committeeman2:Committeeman3:Committeeman4.Committeem

2、an5:Dateoforaldefence:浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果,也不包含為獲得逝塹太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:;㈣簽字日期:沙/甲年石月/0日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解浙江太堂有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝塹太堂可以將學(xué)位

3、論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名:和儉1和簽字日期:歷f坤年6月fo日導(dǎo)師簽名:l夕樞印I-簽字日期:伽Ⅳ年‘月/p日浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文致謝本課題的研究工作是在林建平教授的細(xì)心指導(dǎo)和嚴(yán)格要求下完成的。在此衷心感謝導(dǎo)師對(duì)我的諄諄教誨,以及對(duì)我在學(xué)術(shù)、生活和工作等各方面的無(wú)私幫助。三年的研究生生涯雖然短暫,但林老師淵博的學(xué)識(shí)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、認(rèn)真的工作作風(fēng)和對(duì)事業(yè)的執(zhí)著追求都將使我終生難忘,并時(shí)時(shí)刻刻鞭策我奮發(fā)向上。無(wú)論是在學(xué)習(xí)、生活,還是在研究工作的

4、思路、方法以及科研條件的創(chuàng)造方面,林老師都給予了我細(xì)心的指導(dǎo),師從林老師是我此生莫大的榮幸。另外,感謝吳綿斌副教授在論文投稿期間給予我的關(guān)心和幫助。學(xué)生在此謹(jǐn)向兩位老師表示由衷的感謝和深深的敬意。感謝江蘇益安科技有限公司的朱力工程師,感謝他在我實(shí)驗(yàn)遇到困難和失敗的時(shí)候?qū)ξ业墓膭?lì)和幫助,與他三年的合作讓我受益良多。感謝三年以來(lái)與我互勉共勵(lì)的課題組全體成員,感謝本實(shí)驗(yàn)室的博士生聞志強(qiáng)、袁建鋒,碩士生楊俊、林逸君、陳冠宇、陳永露、張堯,以及薛海龍、章雅琴,和其他實(shí)驗(yàn)室的博士生唐云平,碩士生,文UJII、王海蛟、齊晨等人對(duì)我的熱情幫助,感謝他們教會(huì)了我很多實(shí)驗(yàn)操作技術(shù),讓我的研究工

5、作得以順利完成。還有許多幫助過(guò)我的同學(xué),朋友沒(méi)有一一列出,在此一并表示感謝。本工作是國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.20306026)和國(guó)家“973”項(xiàng)目(No.2007CB707805)的部分內(nèi)容。三年的碩士求學(xué)生涯即將結(jié)束,本人能順利完成學(xué)業(yè),與家人、親戚、朋友的關(guān)心和鼓勵(lì),倪海軍、裘娟萍教授等恩師的教誨與栽培,以及金偉等人的支持和幫助是分不開的,在此謹(jǐn)向他們表示衷心的感謝。最后謹(jǐn)向所有關(guān)心和幫助過(guò)本人的老師、同學(xué)、朋友和親人再次表示衷心的感謝!漏佳偉二零一四年一月II浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要5.氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinicacid,j址A)是生物合成卟啉

6、、葉綠素、亞鐵血紅素和維生素B。:等四吡咯化合物的共同前體物質(zhì),廣泛存在于微生物、植物和動(dòng)物細(xì)胞中。ALA的應(yīng)用非常廣泛,除作為一種環(huán)境相容性和選擇性很高的新型除草劑和農(nóng)藥外,還作為光動(dòng)力學(xué)藥物用于癌癥的光動(dòng)力學(xué)診斷和治療。本工作以外源基因的來(lái)源為出發(fā)點(diǎn),利用來(lái)源不同的5.氨基乙酰丙酸合成酶之間的性質(zhì)差異,以期篩選得到一種酶學(xué)性質(zhì)優(yōu)良并可在大腸桿菌體內(nèi)高活性表達(dá)的酶,為ALA的高效生產(chǎn)奠定良好的基礎(chǔ)。本文首先克隆并表達(dá)了4個(gè)分別來(lái)源于莢膜紅細(xì)菌(R.capsulatus)、大豆根瘤菌(日.japonicum)、嗜酸柏拉紅菌(尺.a(chǎn)cidophilus)、脫氮副球菌(尸.de

7、nitrificans)的編碼5.氨基乙酰丙酸合成酶的hemA基因,并對(duì)上述hemA基因在大腸桿菌E.coliRosetta(DE3)qb的表達(dá)情況、重組酶的比活力和發(fā)酵情況等方面進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,含有莢膜紅細(xì)菌hemA基因的工程菌E.coliRoseua(DE3)/pET28a.RC.hemA表現(xiàn)出更好的合成ALA的潛力。通過(guò)親和層析和凝膠過(guò)濾層析,制備得到重組酶RC.ALAS純品。以放射形土壤桿菌0.radiobacterzju一0121)和類球紅細(xì)菌僻.sphaeroides)的hemA基因所表達(dá)的AR.

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