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《（果樹(shù)學(xué)專(zhuān)業(yè)論文）利用rapd標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行葡萄品種遺傳多樣性研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、摘要葡萄是栽培最廣泛的果樹(shù)之一。在長(zhǎng)期的進(jìn)化和栽培歷史中形成了許多種群和品種群，由于葡萄種內(nèi)變異很大，加上種間的自然雜交以及世界范圍內(nèi)對(duì)葡萄的廣泛繁殖，使得葡萄的分類(lèi)鑒定十分困難。本研究以47個(gè)葡萄栽培品種為試驗(yàn)材料，應(yīng)用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)，迸行葡萄品種的親緣關(guān)系研究，目的在于建立葡萄品種的RAPD反應(yīng)體系；探討葡萄品種間的親緣關(guān)系；為雜交育種提供分子學(xué)依據(jù)。主要結(jié)果如下：l、在傳統(tǒng)CTAB法的基礎(chǔ)上，將分類(lèi)的加入酚的結(jié)合劑(PVP20％)和抗氧化劑(B一巰基乙醇)兩類(lèi)方法組合起來(lái)有效去除多酚類(lèi)雜質(zhì)；并采用高濃度的
2、鹽抑制多糖和DNA一起沉淀從而分離多糖和DNA的方法，制備的DNA無(wú)凝膠狀物質(zhì)、蛋白質(zhì)和酚類(lèi)物質(zhì)，適于PCR擴(kuò)增。2、確定了適合葡萄RAPD反應(yīng)的反應(yīng)體系為：模板DNA為lul(稀釋15倍)，MgCl22．0mmol／L，dNTP0．8mmol／L，TaqDNA聚合酶1U，Primer8pmol，總體積為25ul，剩下的用ddH20來(lái)於充：確定了適合葡萄RAPD反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4分鐘，94℃變性45s，37℃退火55s，72。C延伸80s，40個(gè)循環(huán)，72℃延伸10分鐘。3、從100個(gè)引物中篩選出能穩(wěn)定擴(kuò)
3、增的30個(gè)引物，用這些引物對(duì)47個(gè)葡萄品種進(jìn)行擴(kuò)增，均具有多態(tài)性，共擴(kuò)增出216條帶，121條具有多態(tài)性，多態(tài)性比例為56．叭％。4、對(duì)葡萄屬47個(gè)品種及類(lèi)型進(jìn)行了RAPD擴(kuò)增，根據(jù)相似系數(shù)進(jìn)行了聚類(lèi)分析能將47個(gè)品種聚為5類(lèi)：第1類(lèi)包括巨峰、紅瑞寶、龍寶等巨峰系品種：第2類(lèi)包括玫瑰香、紅旗特早、達(dá)米娜等；第3類(lèi)包括美人指、瑞必爾、黑大粒、紅地球等；第4類(lèi)包括康可、尼加拉、白香蕉等種間雜交和來(lái)源不詳品種；第5類(lèi)包括森田尼無(wú)核、克瑞森無(wú)核等無(wú)核品種。5、建立了京秀、紅旗特早及鳳凰5l等品種的DNA指紋圖譜，找到了它們的
4、特異譜帶，利用不同的引物組合，根據(jù)DNA指紋和特異譜帶，可將47個(gè)參試品種鑒別出來(lái)。6、RAPD技術(shù)在葡萄品種鑒定和純度分析上應(yīng)用的可行性分析RAPD是利用一系列引物對(duì)整個(gè)基因組DNA進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，檢測(cè)區(qū)域幾乎可以覆蓋整個(gè)基因組，可以檢測(cè)出不同品種問(wèn)的微小差異。本研究結(jié)果表明：葡萄品種間的遺傳多態(tài)性有明顯差異，即使父母本相同的品種，也能分開(kāi)。如“京Il玉”和“奧古斯特”同為意大利和葡萄園皇后的雜交后代；“紅瑞寶”和“龍寶”同為金玫瑰和黑潮的雜交后代，利用RAPD技術(shù)很容易分開(kāi)。關(guān)鍵詞：葡萄品種；遺傳多樣性；RAPD
5、遺傳距離；遺傳相似系數(shù)：聚類(lèi)分析lIISummaryManyspeciespopulationandvarietygroupsofgrape(vitis)havebeenformedinthelonghistoryofgrapeevolutionandculturing．Becauseofgreatvariationwithinthespecis，easilynaturecrossbetweenspeciesandwidegenerationinalltheworld，taxonomyandidentificatio
6、nofgropesareverydifficult，Thestudywasundertakentoidentifygrape(vitis)materialofwideusedvarietiesbyrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)．TheaimistoestablishnewanalysissystemofRAPDforgrapecultivar,andtodrawDNAfingerprintingforidentificationofspeciesandvarieties，and
7、toselectmolecularmarkerswithspecialsegmentingrapecultivars．themainresultsasbelow：1．OnthebasisofconventionalmethordCTAB，theantioxidant(pvp20％)andcombinationphysic(B一～lereaptoethan01)wereusedtOwipeoffhydroxybenzeneingrapeleavesandthehi曲densityofsaltwereusedtosepa
8、rateamylose，thiswayisrapidandhighefficienttoextractDNAandtheDNAextractedcanbeusedinRAPDamplificationfromgrapeleaves．SpringleavesarethebestmaterialstoextractDNA．2．Thedifferen
