資源描述：
《mirna-720對(duì)tnf-α誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、中圖分類號(hào)——萬(wàn)方數(shù)據(jù)UDC．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．，．．．．．，．，．——博士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q5三三密級(jí)——miRNA．720對(duì)TNF—u誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制TheEffectsofmicroRNAsonTNF—ainducedApoptosisofPrimaryUmbilicalV．einEndothelialCells作者姓名：李輝學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：麻醉學(xué)(心肌保護(hù))學(xué)院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導(dǎo)教師：徐軍美教授論文答辯日期趔答辯委員會(huì)
2、主席雄中南大學(xué)二。一三年五月萬(wàn)方數(shù)據(jù)原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。作者簽名：夢(mèng)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？?/p>
3、以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽名：拯導(dǎo)師簽日期：蘭生年三月蘭日萬(wàn)方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中文摘要miRNA．720對(duì)TNF．q誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制摘要研究目的1建立原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(瑚ⅣEC)體外培養(yǎng)的方法，討論TNF一0【對(duì)該細(xì)胞凋亡程度的影響；2根據(jù)發(fā)表的論文中相同篩選方式的結(jié)果，探討miRNA．720在HUVEC凋亡中的調(diào)節(jié)功能；3研究
4、miRNA一720對(duì)細(xì)胞凋亡影響的機(jī)制。研究方法本實(shí)驗(yàn)分為三部分：l原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道并加以改進(jìn)，通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)和利用免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；用四種方法(電鏡觀察，Hoechst33258熒光染色，TUNEL法以及westernblot)檢測(cè)HUVEC的凋亡程度；2參考文獻(xiàn)中有關(guān)芯片檢測(cè)結(jié)果，選定miRNA．720為有意義的共同差異表達(dá)microRNA。采用miRNA-720前體(pre—miR-720)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HUVEC從而使得內(nèi)皮細(xì)胞抑制或者過(guò)表達(dá)該microRNA，設(shè)立空白對(duì)照組，用實(shí)
5、時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染的效率。然后用TNF．a(chǎn)干預(yù)轉(zhuǎn)染后的HUVEC，再次通過(guò)Hoechst33258熒光染色、TUNEL法、實(shí)時(shí)定量PCR法以及westernblot等方法檢測(cè)不同轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡程度改變；3使用生物信息學(xué)軟件分析，結(jié)合文獻(xiàn)查詢，預(yù)測(cè)與凋亡相關(guān)的miR．720的靶基因；用熒光素酶報(bào)告基因法驗(yàn)證DNMT3A是否為miR-720作用的靶基因；用miRNA．720抑制劑轉(zhuǎn)染HUVEC，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和westernblot觀察其是否引起靶基因表達(dá)增多；II萬(wàn)方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中
6、文摘要用DNAMethylationPCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)基因甲基化的變化。研究結(jié)果(1)經(jīng)相差顯微鏡觀察以及VIII因子染色證明培養(yǎng)的細(xì)胞中98％為HUVEC，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示95％以上細(xì)胞的存活狀態(tài)良好，TNF一Ⅸ能引起HUVEC凋亡；(2)Hoechst33258熒光染色，TUNEL染色，實(shí)時(shí)熒光定量PCR及westernblot結(jié)果顯示：miRNA．720抑制劑使得TNF．0L誘導(dǎo)的HUVEC凋亡數(shù)量明顯減少，而miRNA．720的過(guò)表達(dá)使得TNF。伐誘導(dǎo)的HUVEC凋亡數(shù)明顯增加；(3)經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)軟件的分析預(yù)
7、測(cè)，DNMT3A很有可能是miRNA．720的候選靶基因，經(jīng)過(guò)熒光素酶報(bào)告基因法，實(shí)時(shí)定量PCR，Westernblot和MSP證實(shí)miRNA．720抑制組該基因的表達(dá)有顯著提升。研究結(jié)論(1)本研究以成功建立HUVEC體外培養(yǎng)方法為基礎(chǔ)，建立了TNF．Ⅸ誘導(dǎo)HUVEC凋亡的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?2)miRNA．720在TNF—a誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞凋亡中表達(dá)明顯上升，能明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡，破壞細(xì)胞生存。(3)miRNA．720促進(jìn)由TNF一伐介導(dǎo)的HUVEC凋亡的作用機(jī)理有可能是通過(guò)轉(zhuǎn)錄后水平抑制DNMT3A的表達(dá)來(lái)完成。關(guān)
8、鍵詞microRNA；內(nèi)皮細(xì)胞；凋亡；TNF．Ⅱ；甲基化萬(wàn)方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文英文摘要TheEffectsofmicroRNA--720onTNF—-ainducedApoptosisofPrimaryUmbilicalVeinEndothelialCellsABSTRACTobjective：(1)Toestablishculturingtechniqueo
