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《玉米淀粉合成關(guān)鍵酶基因shys的遺傳轉(zhuǎn)化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文玉米淀粉合成關(guān)鍵酶基因shys的遺傳轉(zhuǎn)化姓名：屠培培申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：孫慶泉20120614山東農(nóng)業(yè)火學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要玉米是世界第二大糧飼兼用作物，隨著加工業(yè)的不斷發(fā)展，玉米的需求量也與日俱增。用基因工程方法將優(yōu)良基因轉(zhuǎn)入優(yōu)良玉米自交系是當(dāng)前玉米高產(chǎn)育種的重要途徑之一。腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉生物合成過程中的限速酶，受Pi負調(diào)節(jié)，其中2個負調(diào)節(jié)位點在調(diào)節(jié)亞基Sh2上，突變后的基因命名為shys，可提高AGPase活性，進而提高作物總淀粉的合成效率。本研究以玉米自交系A(chǔ)188、齊319和18．59
2、9為試材，對農(nóng)桿菌浸染強度進行了優(yōu)化，對影響基因槍轉(zhuǎn)化效率的因素進行了探索，并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)和基因槍轟擊兩種方法轉(zhuǎn)化了玉米淀粉合成關(guān)鍵酶基因shys。研究的主要結(jié)果如下：1．農(nóng)桿菌浸染強度對愈傷轉(zhuǎn)化效率及植株再生有重要影響。A188浸染強度為OD600=0．4、浸染時間為15rain時褐化率最低，分化率最高；18—599的最佳浸染強度組合是OD600=0．6、浸染時間20min。2．轟擊距離、轟擊次數(shù)以及質(zhì)粒DNA用量對愈傷組織的轉(zhuǎn)化率有較大影響。18．599材料最佳轟擊參數(shù)為轟擊距離9．5cm、轟擊次數(shù)2槍，質(zhì)粒濃度1．0腭；齊319在轟擊距離9．5cm、轟擊次數(shù)l槍，質(zhì)粒濃
3、度1．0ttg時愈傷組織后期篩選的褐化率最低，轉(zhuǎn)化效率最高。3．生根壯苗培養(yǎng)基對抗性苗的生根有利。生根粉ABT濃度為O．5mg·L’1時A188和齊319生根情況均良好，18．599幼苗在ABT濃度為1．5mg·Ld時利于生根，平均生根條數(shù)3根，平均根長可達2．6cm。4．農(nóng)桿菌浸染法獲得400株抗性植株，經(jīng)PCR檢測獲得了15株A188轉(zhuǎn)化株和19株18．599轉(zhuǎn)化株，陽性苗得率為8．5％，再經(jīng)RT-PCR檢測得到3株A188陽性株和6株18．599陽性株，陽性苗得率為3．5％；基因槍法共得到195株抗性苗，PCR檢測共有13株苗呈陽性，其中齊319三株，18．599十株，
4、陽性苗得率為6．7％，RT-PCR檢測時齊319和18．599陽性株各2株，陽性苗得率為3．2％。部分Southem雜交結(jié)果顯示有明顯的雜交條帶。農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化效率略高于基因槍。5．轉(zhuǎn)基因苗移栽大田后，套袋隔離，自交結(jié)實，收獲了18-599和齊319材料T0代的種子。關(guān)鍵詞：玉米：自交系；農(nóng)桿菌介導(dǎo)；基因槍：浸染強度；分子檢測玉米淀粉合成關(guān)鍵酶基因shys的遺傳轉(zhuǎn)化GeneticTransformationofGeneshysoftheKeyEnzymeforStarchSynthaseonMaizeABSTRACTMaize(ZeaMaysL．)isthesecondlarg
5、estcerealcropandfoddercropintheworld．Withthecontinuousdevelopmentofprocessingindustry，thedemandofmaizeisalsoincreasing．Itisoneoftheimportantwaystocombreedingforhighyieldthattransfergoodgenesintoexcellentinbredlines、)vitllthegeneticengineering．Inrecentyears，theresearchofthisfieldhasmadealoto
6、fprogress．AGPaseisakeyenzymeinstarchbiosynthesisandisregulatedbyPinegatively．TwoofthenegativeregulatorysitesareontheregulatorysubunitSh2，andthemutatedgeneisnamedtheshys．ItimprovestheactivityofADPglucosepyrophosphorylaseandthenincreasescropstarchsynthesisefficiency．Inourstudy，maizeinbredline
7、sA188，Qi319，and18-599wereusedastestmaterials．TheAgrobacteriumdipstrengthwereoptimizedandthefactorsthataffectbiolistictransformationefficiencywerestudied．ThenthecomstarchbiosynthesisgeneshysWastransformedbyAgrobacterium-mediatedtechniqueandgenegunbombardm
