資源描述：
《人精子線粒體dna多重缺失和弱精子癥相關(guān)性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人精子線粒體DNA多重缺失與弱精子癥的相關(guān)性研究姓名：王吉瑩申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：管敏鑫；金龍金201103溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人精子線粒體DNA多重缺失與弱精子癥的相關(guān)性研究中文摘要目的1、通過長片段PCR與巢式PCR方法，篩查弱精子癥患者精子線粒體DNA多重缺失的發(fā)生情況。2、比較弱精子癥患者精子標(biāo)本線粒體DNA與正常精子標(biāo)本之間多重缺失的差異。3、討論線粒體DNA多重缺失和弱精子癥的相互關(guān)系。方法1、根據(jù)病理學(xué)診斷結(jié)果收集男性弱精子癥患者(不育組)精液標(biāo)本59例，健康男性(
2、生育組)精液標(biāo)本56例。2、通過手工法與試劑盒法相結(jié)合的方法提取精子總DNA，先用長片段PCR擴增線粒體DNA，然后設(shè)計巢式PCR，繼續(xù)擴增長片段PCR擴增后的產(chǎn)物，以達到放大缺失條帶的目的，再通過瓊脂糖電泳方法來檢測缺失的有無及缺失種類、數(shù)量和大小。3、通過T載體與缺失后擴增出的目的條帶連接構(gòu)建質(zhì)粒，藍白斑篩選后提取質(zhì)粒PCR鑒定后測序，確定缺失片段的斷裂位點。4、采用SPSS軟件，用單向方差分析比較弱精子癥患者與正常對照之間線粒體多重缺失數(shù)目(通過長片段PCR結(jié)合巢式PCR后所檢測到的條帶)和缺失平均大小的區(qū)別。結(jié)果
3、1、在59例不育組標(biāo)本中檢測到47例(80％)存在mtDNA缺失，其中單個缺失(只有一條缺失條帶)有5例占8％，雙重缺失(有2條缺失條帶)有2例占3％，多重缺失(缺失條帶大于2條)有40例占68％。在56例生育組標(biāo)本中檢測到36例(“％)存在mtDNA缺失，單個缺失9例占16％，雙重缺失8例占14％，多重缺失19例占34％。不育組與可育組相比，在不育組中發(fā)生缺失的現(xiàn)象要嚴(yán)重，并且多重缺失所發(fā)生的比例更大，而可育組相對包含的缺失數(shù)目則較少。2、在不育組59例標(biāo)本中共篩查到缺失片段205條，大小在lkb到8kb之間，平均片段
4、大小為6．29kb；可育組共篩查到缺失片段96條，大小在3kb到8kb之間，平均片段大小為5．9kb。其中在不育組中，6．1．8．0kb之間的大片段缺失3溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文條帶數(shù)在總?cè)笔l帶數(shù)中占72．68％，可育組中也發(fā)現(xiàn)了高比例(70．83％)的大片段缺失，然而兩組在各缺失大小區(qū)間內(nèi)篩查到的缺失條帶數(shù)占各自總?cè)笔l帶數(shù)的百分比相似，沒有顯著性差異。3、克隆測序一例缺失片段，結(jié)果顯示缺失區(qū)域位于線粒體DNAnt6847--14998之間，缺失片段長度為8152bp，為目前尚未報道發(fā)現(xiàn)的缺失位點。所篩查到的mtDNA
5、8152缺失在不育組和生育組中所占比例分別為68％和55％。結(jié)論l、從缺失的種類和數(shù)量來看，不育組發(fā)生缺失的現(xiàn)象要比可育組嚴(yán)重，并且多重缺失所占的比例達到68％，推測精子mtDNA的缺失可能是影響精子活動力的原因之一，并且在多種缺失種類中，多重缺失對精子活動力的影響更大。2、從缺失條帶的大小來看，在不育組中，6．1．8．0kb之間的大片段缺失條帶數(shù)在總?cè)笔l帶數(shù)中占72．68％，推測精子mtDNA中的大片段缺失對精子活動力有重要的影響。然而在不育組與可育組之間，各種大小的缺失片段所占比例趨勢相似，在可育組中也存在大片段的
6、缺失條帶，推測這些缺失條帶可能是來自于可育組中精子活動力差的c級與d級精子。3、實驗中篩查到一例這mtDNA8152缺失，缺失導(dǎo)致了線粒體結(jié)構(gòu)基因COI、CO口、ATPase6／8、a衄：ND4、ND4L、肋5、ND6，Cytb和9個tRNAs的缺失。經(jīng)過電泳鑒定，這種mtDNA8152bp缺失在不育組和可育組中都有出現(xiàn)，可能會導(dǎo)致大部分的呼吸鏈功能缺陷，造成精子氧化磷酸化與ATP產(chǎn)生障礙，影響精子的運動能力。關(guān)鍵詞線粒體DNA：弱精子癥；大片段缺失；Long-PCR；巢式PCR4溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Correlati
7、onAnalysisbetweenHumanSpermMitochondrialDNAMultipleDeletionsandAsthenospermiaobjeefive1、T0detecttheincidenceofmultipledeletionsinmitochondrialDNAoftheasthenospermiapatientsbYlong-rangePCRandnestedPCR．2、FindthedifferenceinmitochondrialDNAmultipledeletionsbetweenth
8、easthenospermiaspermandnormalsperm．3、DiscussiontherelationshipbetweenmitochondrialDNAmultipledeletionandasthenospermia．Methods1、AccordingtotheresultsofpaIllolo
