mir-29c對hbv相關(guān)肝癌的調(diào)控機(jī)制研究

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1、分類號:密級:單位代碼:10422學(xué)號:加10I弓J弓與⑧∥蔡辦孑碩士學(xué)位論文論文題目:作者學(xué)院/L7—7≥妥久。‘、L—/姓名稱L.—,,‘專琵/,-Y≯匱津陷專業(yè)名稱瘟堡鯊魚瘟堡壘互里暨指導(dǎo)教師二亟)塑衛(wèi)合作導(dǎo)師耋i艮z勘,弓年r月,7I三1原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名:棣售任日期:矽既薌、2o關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲

2、明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱;本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名:叢壘墜導(dǎo)師簽名:劾趔1日期:∞&90D山東大學(xué)碩士學(xué)位論文口罩目冰中文摘要???????????????????????????????????.I英文摘要????????????????????????????????????3符號說明??????????????

3、?????????????????5前言???????????????????????????????????????7材料與方法??????????????????????????????????】11。材料??????????????????????????????????????????????.111.1生化試劑?????????????????????????????111.2主要的儀器設(shè)備及其它???????????????????????121.3臨床組織?????????????????????????????131.4細(xì)胞系及細(xì)胞的培養(yǎng)????????

4、????????????????131.5常用試劑?????????????????????????????131.6抗1本?????????????????????????????????????????151.7PCR引物??????????????????????????????????????..151.8質(zhì)粒和菌種????????????????????????????152.方法???????????????????????????????????????????????172.1利用miRNA芯片對miR-29c進(jìn)行表達(dá)分析???????????????1

5、82.2對miR一29c靶基因的預(yù)測??????????????????????182.3熒光定量RT-PCR檢測miR一29c表達(dá)?????????????????.】82.4RT—PCR檢測TNFAIP3在肝癌細(xì)胞系及臨床標(biāo)本中的表達(dá)?????????192.5構(gòu)建miR-29c的表達(dá)載體??????????????????????212.6靶基因表達(dá)載體的構(gòu)建???????????????????????252.7轉(zhuǎn)染????????????????????????????????????????.282.8體外轉(zhuǎn)染miR-29c后TNFAIP3的檢測??????

6、???????????302.9轉(zhuǎn)染pS—miR-29c對HBVDNA復(fù)制、抗原表達(dá)的影響??????????一342.10轉(zhuǎn)染pS—miR-29c對細(xì)胞增殖和凋亡的影響??????????????352.11.?dāng)?shù)據(jù)統(tǒng)計分析??????????????????????????363.結(jié)果???????????????????????????????????????????????..373.1miR一29c在HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)下調(diào)?????????????373.2miRNA的生物信息學(xué)分析??????????????????????373.3TNFAIP3在

7、細(xì)胞系及臨床標(biāo)本中的表達(dá)????????????????.383.4miR一29c表達(dá)載體的構(gòu)建、制備與鑒定????????????????.383。5轉(zhuǎn)染后pS-miR-29c表達(dá)水平的檢測?????????????????一383.6雙熒光報告系統(tǒng)的檢測???????????????????????393.7轉(zhuǎn)染miR一29c表達(dá)載體后TNFAIP3表達(dá)下降??????????????393.8miR一29c表達(dá)載體抑制細(xì)胞的生長并促進(jìn)細(xì)胞凋亡???????????.393.9miR一29c抑制HBVDNA復(fù)制和HBsAg,HBeAg

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