大麗花衰老相關(guān)基因xth的表達(dá)特征和功能分析

大麗花衰老相關(guān)基因xth的表達(dá)特征和功能分析

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1、碩士學(xué)位論文論文題目大麗花衰老相關(guān)基因XTH的表達(dá)特征和功能分析研究生姓名王蕾指導(dǎo)教師姓名談建中專業(yè)名稱園林植物與觀賞園藝研究方向園林植物生物技術(shù)論文提交日期2013年4月大麗花衰老相關(guān)基因XTH的表達(dá)特征和功能分析中文摘要大麗花衰老相關(guān)基因XTH的表達(dá)特征和功能分析中文摘要植物衰老是基因表達(dá)、蛋白質(zhì)合成以及內(nèi)外因素綜合調(diào)控的發(fā)育過程,屬于細(xì)胞的程序化死亡,該過程涉及衰老相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控作用。木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖苷酶/水解酶(Xyloglucanendotransglycosylase/hydrolase,XTH)是一種由多種XTHs基因編碼可以引起細(xì)胞壁中纖維素微纖網(wǎng)結(jié)構(gòu)改變的細(xì)胞壁重構(gòu)水解

2、酶,可參與細(xì)胞壁的擴(kuò)展和降解,并在呼吸躍變型果實(shí)及乙烯敏感型切花的衰老過程中起到重要的調(diào)控作用。在乙烯非敏感型的大麗花(DahliapinnataCav)中,雖然已克隆了DpXTH1和DpXTH2基因,但其在衰老過程中的調(diào)控機(jī)理尚不清楚。本研究以大麗花‘單瓣黃’品種為試驗(yàn)材料,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),分別對(duì)不同發(fā)育時(shí)期的花瓣、葉片、愈傷組織,不同的組織器官(根、莖、葉片、花瓣),外源乙烯及1-MCP處理后的花瓣中DpXTH1和DpXTH2基因的表達(dá)特征及功能進(jìn)行分析,主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)設(shè)計(jì)DpXTH1和DpXTH2的實(shí)時(shí)定量PCR特異引物,檢測(cè)了18srRNA、β-actin和G

3、APDH三個(gè)內(nèi)參基因在大麗花花瓣衰老過程中的表達(dá)穩(wěn)定性。結(jié)果表明內(nèi)參基因β-actin在大麗花各組織發(fā)育過程中的表達(dá)最為穩(wěn)定,適用于后續(xù)試驗(yàn)的定量分析。(2)大麗花的花瓣生長可分為現(xiàn)蕾期、初花期、盛花期和衰敗期,檢測(cè)結(jié)果表明DpXTH1和DpXTH2的表達(dá)均在花瓣發(fā)育前期呈上調(diào)表達(dá),至盛花期達(dá)到峰值,之后隨著花瓣的衰敗表達(dá)量有所下降,說明大麗花花瓣衰老過程與XTH基因表達(dá)之間存在著某種關(guān)系。(3)以大麗花盛花期的花瓣、葉、根、莖為材料進(jìn)行定量分析,結(jié)果表明DpXTH1和DpXTH2兩個(gè)基因在根中均不表達(dá),在莖和葉片中表達(dá)豐度極低,在花瓣中高豐度表達(dá),說明DpXTH1和DpXTH2為大麗花花

4、瓣組織特異性基因,它們的表達(dá)及功能與花瓣細(xì)胞的生長發(fā)育密切相關(guān)。(4)取大麗花的幼葉、成熟葉和老葉3個(gè)生長階段為材料進(jìn)行定量分析,檢測(cè)結(jié)果表明DpXTH1和DpXTH2的表達(dá)量均在葉片發(fā)育早期最高,此后隨著葉片的衰I中文摘要大麗花衰老相關(guān)基因XTH的表達(dá)特征和功能分析老逐漸下降。在繼代培養(yǎng)的愈傷組織生長過程中,分別取生長30d、60d、120d的愈傷組織為試驗(yàn)材料。結(jié)果表明DpXTH1在分化30d時(shí)其相對(duì)表達(dá)量最高,隨著誘導(dǎo)分化天數(shù)的增加逐漸降低,而DpXTH2的表達(dá)量在愈傷組織的整個(gè)生長過程中表達(dá)量變化并不明顯,說明DpXTHs基因的表達(dá)特征也因組織器官的不同而會(huì)有所改變。(5)外源乙烯

5、和1-MCP處理后,花瓣中DpXTH1和DpXTH2的表達(dá)量均呈先上升后下降的變化趨勢(shì)。處理組與對(duì)照組相比,不同發(fā)育時(shí)期花瓣中基因的表達(dá)量均達(dá)到極顯著水平(p<0.01),說明DpXTH1和DpXTH2基因的表達(dá)對(duì)外源乙烯具有敏感性。(6)在大麗花不同組織器官、各器官不同發(fā)育時(shí)期以及不同處理?xiàng)l件下,DpXTH1的相對(duì)表達(dá)量均高于DpXTH2,說明在與大麗花生長發(fā)育相關(guān)的生理代謝中,DpXTH1基因的表達(dá)與調(diào)控占有重要地位。關(guān)鍵詞:大麗花;木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖苷酶/水解酶基因;基因表達(dá);衰老;實(shí)時(shí)熒光定量PCR作者:王蕾指導(dǎo)教師:談建中IIAnalysisofExpressionCharacter

6、isticsandFunctionofSenescence-associatedGeneXTHinDahliaAbstractAnalysisofExpressionCharacteristicsandFunctionofSenescence-associatedGeneXTHinDahliaAbstractPlantsenescenceisthedevelopmentprocessthatregulatedcomprehensivelybygeneexpression,proteinsynthesisaswellastheinternalandexternalfactors,belong

7、ingtoprogrammedcelldeath.Itinvolvesexpressionandregulationofsenescence-associatedgenes.Xyloglucanendotransglycosylase/hydrolaseiscellwallmodifyingenzymechangescellulosemicrofibrilsnetworkofcellwall,andisencodedby

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