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《墨旱蓮提取物旱蓮苷a抑制hepg-2細(xì)胞的活性研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文墨旱蓮提取物旱蓮苷A抑制HepG-2細(xì)胞的活性研究姓名：李勝友學(xué)號(hào)：2111540054院系：藥學(xué)院學(xué)位類型：學(xué)術(shù)學(xué)位專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)研究方向：植物提取物抗腫瘤作用導(dǎo)師：黃宏靚論文提交日期：2018年3月論文答辯日期：2018年5月學(xué)位授予單位：廣東藥科大學(xué)二〇一八年五月廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文ThestudyofinhibitoryeffectofecliptasaponinAonHepG-2CellsCandidate：LiShengyouStudentID：2111540054Affili
2、ation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：AcademicdegreeSpeciality：MicrobiologyandBiochemicalPharmacySupervisor：AssociateProf.HuangHongliangDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文墨旱蓮提取物旱蓮苷A抑制HepG-2細(xì)胞的活性研究摘要目的
3、：隨著科技的不斷發(fā)展，腫瘤治療取得了巨大進(jìn)步?；?、放療等傳統(tǒng)的治療方法雖然提高了治療效果，同時(shí)也帶來了很大的副作用，甚至部分腫瘤產(chǎn)生了耐藥性。為了優(yōu)化治療腫瘤的方法和獲得積極的治療效果，在中藥中探索發(fā)現(xiàn)新的抗腫瘤活性成分呢一直廣受關(guān)注。其中中藥墨旱蓮具有多種藥理活性，也具有一定的抗腫瘤活性，但其作用機(jī)制還不清除。旱蓮苷A是其中主要的成分，提取及分離技術(shù)成熟，我們?cè)噲D探索旱蓮苷A抗腫瘤作用及其可能的作用機(jī)制。方法：本論文對(duì)旱蓮苷A抗腫瘤活性、促細(xì)胞凋亡機(jī)制和促細(xì)胞自噬機(jī)制進(jìn)行了研究。MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)旱蓮苷A對(duì)肝癌細(xì)胞（HepG-2細(xì)胞）的
4、增殖抑制作用；通過多種染色實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證藥物能否誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及對(duì)凋亡細(xì)胞形態(tài)的影響；通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)旱蓮苷A抑制HepG-2細(xì)胞遷移和侵襲情況；MDC（丹酰戊二胺）染色檢測(cè)旱蓮苷A是否能夠誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬；通過線粒體膜電位檢測(cè)，活性氧檢測(cè)及流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，單細(xì)胞凝膠電泳觀察單個(gè)細(xì)胞DNA損傷程度；Westernblot免疫印跡法檢測(cè)旱蓮苷A作用于細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)凋亡和自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。I廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文結(jié)果：MTT結(jié)果顯示旱蓮苷A處理細(xì)胞48h后，旱蓮苷A明顯抑制HepG-2細(xì)胞的生
5、長，且呈濃度依賴性趨勢(shì)，其IC50為（29.8±1.6）μmol/L（與對(duì)照組比較P＜0.05）。通過AO/EB染色發(fā)現(xiàn)，濃度為12.5μmol/L、25μmol/L的藥物組可看到凋亡細(xì)胞明顯增加，表現(xiàn)出明顯的凋亡學(xué)形態(tài)特征。流式細(xì)胞術(shù)表明HepG-2細(xì)胞在旱蓮苷A作用48h后，發(fā)生了不同程度的凋亡，其細(xì)胞早期凋亡比例分別增加了4.06%和11.82%。濃度為12.5μmol/L、25μmol/L旱蓮苷A作用48h后，可顯著阻滯細(xì)胞周期，阻滯在S期的比例分別為24.03%、43.19%。彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明旱蓮苷A能引起細(xì)胞DNA的損傷。細(xì)
6、胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)顯示旱蓮苷A可有效抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲。MDC染色結(jié)果表明，旱蓮苷A作用HepG-2細(xì)胞48h后，能夠明顯的誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬。Westernblot結(jié)果顯示，旱蓮苷A作用HepG-2細(xì)胞48h后，細(xì)胞中Bcl-2和PARP等蛋白水平均有下調(diào)，且caspase-3和Bax等蛋白水平升高，表明旱蓮苷A可能通過干擾線粒體信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Westernblot結(jié)果顯示，旱蓮苷A能夠下調(diào)p62和LC3Ⅰ/Ⅱ的比例，提高Beclin1的比例，表明旱蓮苷A可引起HepG-2細(xì)胞自噬。結(jié)論：可以初步推測(cè)，一定濃
7、度的旱蓮苷A作用于HepG-2細(xì)胞后，可以促進(jìn)線粒體依賴凋亡通路的激活，發(fā)揮凋亡作用；也可能是通過增II廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文加Beclin1，從而增加LC3Ⅰ/Ⅱ的比例，促進(jìn)HepG-2細(xì)胞的自噬。關(guān)鍵詞：旱蓮苷A；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞自噬；腫瘤III廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文THESTUDYINHIBITORYEFFECTOFECLIPTASAPONINAONHEPG-2CELLSAbstractObjective：Withthedevelopmentofbioscience,thecognitionofthepathogen
8、esisoftumorisgraduallydeepened.Inordertoimprovetheefficiencyofcancertreatmentandexplorethebesttherapeut
