異土木香內(nèi)酯通過AMPK信號通路抗肝癌作用研究

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1、廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文分類號：___________密級：__________UDC：___________異土木香內(nèi)酯通過AMPK信號通路抗肝癌作用研究姓名：鐘淇濱學(xué)號：2111540162院系：藥學(xué)院學(xué)位類型：專業(yè)學(xué)位專業(yè)：藥學(xué)研究方向：藥物研發(fā)與轉(zhuǎn)化導(dǎo)師：臧林泉教授論文提交日期：2018年5月25日論文答辯日期：2018年5月15日學(xué)位授予單位：廣東藥科大學(xué)二〇一八年五月廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文StudyonAnti-hepatocarcinomaEffectofIsoalantolactonethroughAMPKSignalingPathwayCandida

2、te：ZhongQibinStudentID：2111540162Affiliation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：professionaldegreeofPharmaceuticalSpeciality：PharmaceuticalSupervisor：Prof.ZangLinquanAssistantSupervisor：SeniorEngineerXuWendongDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUnivers

3、ity052018廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文廣東藥科大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：本人所呈交的學(xué)位論文，系我個人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進行研究工作所取得的成果。除文中已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其它個人或機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本研究做出貢獻的其它個人和集體，均已在文中明確說明和致謝。本人充分意識到本聲明的法律結(jié)果完全由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣東藥科大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留和向有關(guān)部門或機構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。學(xué)校可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫，可以采用影

4、印、縮印或其它復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后適用本聲明。論文作者簽名：論文導(dǎo)師簽名：廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文異土木香內(nèi)酯通過AMPK信號通路抗肝癌作用研究摘要肝癌是全世界最常見六大癌癥，也是癌癥中導(dǎo)致死亡的第二大原因，我國肝癌的發(fā)病率在世界水平上相對較高，對還在處于發(fā)展中的中國的醫(yī)療和社會保障產(chǎn)生了嚴(yán)重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。肝癌有著發(fā)現(xiàn)難，進展快的特點，目前還沒有標(biāo)志物能夠準(zhǔn)確檢測出早期肝癌，通常患者確診的時候已經(jīng)到達(dá)晚期，錯過了最佳手術(shù)治療時機。目前治療肝癌的靶向性藥物的特異性都不高，并且針對單一靶點的靶向藥物連續(xù)用藥后容易產(chǎn)生耐藥性，仍然需要找到針對更多靶點的藥物增

5、加肝癌治療效果，延長患者的生存期，改善生活質(zhì)量。AMPK是一種與能量代謝相關(guān)的蛋白，當(dāng)細(xì)胞中ATP低于閾值后會激活A(yù)MPK，抑制ATP消耗，包括脂質(zhì)、RNA和蛋白質(zhì)的合成。腫瘤細(xì)胞是一種高增殖的細(xì)胞，會消耗大量的ATP用于合成各種物質(zhì)，腫瘤組織中AMPK的表達(dá)會比腫瘤周圍組織明顯減低，提示AMPK是一種潛在的抗腫瘤靶點。中醫(yī)中藥是我國傳統(tǒng)智慧的產(chǎn)物，有將近幾千年的歷史證明其有效性，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)中藥的有效成分是一種重要的新藥來源，最新發(fā)現(xiàn)異土木香內(nèi)酯除了有抗菌殺蟲作用以外，還有抗腫瘤作用。因此本研究目的在于探索異土木香內(nèi)酯體內(nèi)外抗肝癌作用，是否通過AMPK信號通路產(chǎn)生作用，并且初

6、步探索相關(guān)機制。本課題研究內(nèi)容分為三個部分。I廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第一部分：異土木香內(nèi)酯的體外抗肝癌作用采用MTT檢測方法研究異土木香內(nèi)酯的體外抗肝癌效果，明確了其抗腫瘤的劑量和時間依賴性，并求出其IC50。異土木香內(nèi)酯對Bel-740224h、48h和72h的IC50分別為37.4、25.46、22.36μM。HepG2則是34.82、26.32、20.22μM。第二部分：異土木香內(nèi)酯的體內(nèi)抗肝癌作用建立肝癌細(xì)胞Bel-7402的BALB/c荷瘤裸鼠模型。將異土木香內(nèi)酯制備脂質(zhì)體，每天灌胃給藥1次，連續(xù)用藥14天，隔天測量腫瘤體-1積和裸鼠重量，第15天處死動物后取腫瘤

7、組織稱重。90mg?kg異土木香內(nèi)酯的體積抑制率有67.32%，重量抑制率有70.15%，并且其體內(nèi)抗腫瘤作用具有一定的安全性。第三部分：異土木香內(nèi)酯抗腫瘤機制研究利用Hoechst33258觀察異土木香內(nèi)酯對肝癌細(xì)胞的形態(tài)改變。使用AnnexinV-FITC、PI、DCFH-DA染色配合流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡、周期抑制、ROS生成情況。結(jié)果顯示40μM異土木香內(nèi)酯能夠誘導(dǎo)肝癌凋亡，將肝癌細(xì)胞增殖阻滯在G2/M期，同時可以顯著升高ROS水平。使用Westernbolt