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1、廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文分類號：___________密級:__________UDC:___________血清外泌體促小鼠燙傷創(chuàng)面愈合的作用研究姓名：謝正學(xué)號：2111540165院系：藥學(xué)院學(xué)位類型：專業(yè)學(xué)位專業(yè)：藥學(xué)研究方向：外泌體的功能研究導(dǎo)師姓名：毛建文（教授）論文提交日期：2018年5月25日論文答辯日期：2018年5月23日學(xué)位授予單位：廣東藥科大學(xué)二○一八年五月廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文血清外泌體促小鼠燙傷創(chuàng)面愈合的作用研究中文摘要目的：1.確認(rèn)外泌體是否會(huì)促進(jìn)燙傷創(chuàng)面的愈合。2.初步探討外泌體促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合的相關(guān)機(jī)制。方法：1.采用
2、試劑盒法分離外泌體，并通過免疫印跡法檢測外泌體標(biāo)志蛋白，透射電鏡觀察外泌體形態(tài)及納米顆粒跟蹤分析儀測定外泌體粒徑。2.選取NIH小鼠建立皮膚深二度燙傷模型，通過HE染色判斷造模是否成功。3.燙傷皮膚皮下注射血清外泌體，定期測量各組小鼠燙傷區(qū)域面積，評估外泌體的療效。4.取燙傷部位皮膚進(jìn)行HE染色，觀察皮膚組織的病理變化。5.熒光標(biāo)記法觀察外泌體能否進(jìn)入皮膚組織細(xì)胞。6.MTT法檢測血清外泌體對成纖維細(xì)胞增殖的影響。7.流式細(xì)胞術(shù)檢測血清外泌體對表皮細(xì)胞凋亡的影響。8.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測血清外泌體對表皮細(xì)胞遷移的影響。9.蛋白免疫印跡檢測燙傷組，正常組和外泌體組皮膚的AKT磷酸化水平。10.細(xì)胞免
3、疫熒光檢測血清外泌體對血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的影響。11.實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測血清外泌體對VEGFmRNA的影響。結(jié)果：1.試劑盒法分離的的大鼠血清外泌體均表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白：CD63，HSP70；粒徑均一性良好，均127nm左右，呈雙層膜結(jié)果。2.成功建立小鼠深二度皮膚燙傷模型。血清外泌體可以明顯縮小燙傷疤痕的面積。且能有效修復(fù)皮膚的附屬結(jié)構(gòu)和改善膠原纖維的排列。3.血清外泌體能促進(jìn)小鼠原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的增殖。4.血清外泌體能促進(jìn)表皮Hacat細(xì)胞的遷移。I廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文5.血清外泌體能抑制熱損傷誘導(dǎo)的Hacat細(xì)胞凋亡。6.血清外泌體能逆轉(zhuǎn)燙傷誘導(dǎo)的皮膚
4、組織AKT去磷酸化。7.血清外泌體能提高血管內(nèi)皮EA.hy926細(xì)胞VEGF蛋白的含量。8.血清外泌體抑制血管內(nèi)皮EA.hy926細(xì)胞的VEGFmRNA的表達(dá)。結(jié)論：1.血清外泌體能促進(jìn)燙傷小鼠皮膚的愈合。2.血清外泌體可能通過誘導(dǎo)AKT磷酸化促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移，同時(shí)通過VEGF蛋白促血管新生發(fā)揮其促創(chuàng)面愈合的作用。關(guān)鍵詞：血清外泌體，燙傷，創(chuàng)面愈合，AKT，VEGFTheeffectofserum-derivedexosomesonthewoundhealinginscaldedmiceAbstractObjective：1.Toconfirmwhethertheserum-derivede
5、xosomespromotethehealingofscaldedwound.2.Toinvestigatetheunderlyingmechanismofserum-derivedexosomespromotingthehealingofscaldwound.Methods：1.ElectronmicroscopewasusedtoidentifythemorphologyoftheexosomesextractedfromratserumbyExoQuickreagent.TheexpressionofexosomalmarkerproteinCD63andHSP70wasdetected
6、bywesternblotting.UsingNTAtodetectthediameterofexosome.2.NIHmicewereselectedtoestablishtheskindeeptwodegreescaldmodelofskin.TheHEstainingwasusedtojudgewhetherthemodelwassuccessful.II廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文3.Serum-derivedexosomeswereinjectedsubcutaneouslyintothescaldedskin.Thescaldedareasofeachgroupwereregul
7、arlymeasured,andthescaldedskinwasremovedandstainedwithHE.Thepathologicalchangesofskintissuewereobservedbymicroscope,andthecurativeeffectwasevaluated.4.Fluorescencemicroscopewasusedtoobservewhetherthee
