脂多糖預(yù)處理對(duì)低氧誘導(dǎo)小鼠表達(dá)hif-1α的影響

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1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：基豳兩日期：如B，L，．7S蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的

2、內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書(shū)館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所(含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在——年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名：三至函匭Et期：墊立!!：!皇導(dǎo)師簽名：至k塑縐日期：窆堡：!!：Lr脂多糖預(yù)處理對(duì)缺低氧誘導(dǎo)小鼠HIF-Ia的影

3、響中文摘要1脂多糖預(yù)處理對(duì)細(xì)胞性低氧小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)HIF．1a和VEGF的影響目的觀察致炎因子脂多糖預(yù)處理對(duì)低氧狀態(tài)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞在體外表達(dá)HIF．1a和VEGF的影響。方法培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264．7，采用CCK8法觀察細(xì)胞在LPS和CoCl2作用下經(jīng)不同時(shí)間培養(yǎng)后的增值情況，再將細(xì)胞分為以下4組：正常對(duì)照組(無(wú)處理因素)，LPS(1mg／L)組，COCl2(1001amol／L)組，LPS(1mg／L)預(yù)處理組(LPS-Pre，LPS作用8h后再給予COCl2刺激)。采用RT-PCR檢測(cè)LPS和CoCl

4、2對(duì)Raw264．7表達(dá)HIF．1a和VEGFmRNA的影響；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法在鏡下定性觀察HIF．1a和VEGF蛋白在細(xì)胞的表達(dá)情況，采用Westernblot定量檢測(cè)HIF．1a和VEGF蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果(1)CCK8數(shù)據(jù)顯示LPS和CoCl2對(duì)Raw264．7細(xì)胞增殖的影響均在8h后趨向穩(wěn)定；(2)RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，CoCl2組和LPS．Pre組表達(dá)HIF．1amRNA和VEGFmRNA均增加(P<0．05)，其中，LPS．Pre組表達(dá)水平高于CoCl2組(尸

5、3)DAB染色和Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，LPS組，CoCl2組，LPS．Pre組表達(dá)HIF．1a和VEGF蛋白均增加(P

6、雄性ICR(SPF級(jí))小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(無(wú)處理因素)，LPS組，低氧組，LPS預(yù)處理組(LPS．Pre組)。對(duì)照組無(wú)任何處理因素，給予低氧組咽后壁吸入生理鹽水(509L)，給予LPS組和LPS-Pre組咽后壁吸入LPS(509L，29／L)。將低氧組和LPS預(yù)處理組小鼠放置于缺氧瓶中給予持續(xù)低氧處理2．5h后，處死小鼠，同時(shí)也處死未作低氧處理的對(duì)照組和LPS組小鼠，各組小鼠經(jīng)解剖取出完整肺臟稱取肺濕重，計(jì)算肺系數(shù)；取部分肺組織經(jīng)HE染色進(jìn)行組織病理學(xué)觀察；部分肺組織經(jīng)RT-PCR法檢測(cè)各組HIF．1ttm

7、RNA的表達(dá)水平、并以Westernblot法檢測(cè)各組HIF．1a蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果(1)吸入LPS的兩組小鼠肺系數(shù)明顯增高，HE染色顯示肺內(nèi)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肺組織發(fā)生炎性實(shí)變；(2)RT-PCR結(jié)果顯示，LPS．Pre組HIF．1amRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組；也明顯高于LPS組和低氧組(P<0．05)(3)Westernblot結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，LPS組和LPS．Pre組HIF．1a蛋白表達(dá)增加(P<0．05)，低氧組HIF．1a蛋白表達(dá)雖略有增加，但尚不顯著；其中，LPS．Pre組表達(dá)水平也明

8、顯高于LPS組和低氧組(P<0．05)。結(jié)論LPS預(yù)處理可增強(qiáng)小鼠肺組織在低氧時(shí)HIF．1amRNA和蛋白的表達(dá)。關(guān)鍵詞：LPS，炎癥，低氧，HIF．1a，RT-PCR，Westernblot，小鼠II作者：江麗麗指導(dǎo)老師：謝可鳴謝平脂多糖預(yù)處理對(duì)低氧誘導(dǎo)小鼠表達(dá)HIF—la的影響英文摘要EffectsofInflammatoryResponseontheExpressionofHIF