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《遷地保護黃檗群體的遺傳多樣性評價_閆志峰》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、第33卷第10期中國中藥雜志Vo.l33,Issue102008年5月ChinaJournalofChineseMateriaMedicaMay,2008遷地保護黃檗群體的遺傳多樣性評價*閆志峰,張本剛,張昭(中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學藥用植物研究所,北京100094)[摘要]目的:評價遷地保護黃檗群體的遺傳多樣性水平。方法:利用8對熒光引物,對10個遷地保護黃檗群體共計67株個體進行AFLP分析。結(jié)果:共擴增1574條譜帶,其中多態(tài)帶1354條;黃檗物種水平的遺傳多樣性高于遷地保護群體水平,多態(tài)位點百分率PPL分別是86102,41155,有效等位基因數(shù)Ne分別為11427
2、5,112376,Nei基因多樣性指數(shù)H分別是012312,011400,Shannon信息指數(shù)I分別是013973,012113。結(jié)論:初步評價了黃檗遷地保護效果。[關(guān)鍵詞]珍稀瀕危藥用植物;黃檗;遷地保護;AFLP;遺傳多樣性;[中圖分類號]R282.5[文獻標識碼]A[文章編號]1001-5302(2008)10-1121-06[9,10]黃檗PhellodendronamurenseRupr.為蕓香科黃檗在以往遷地保護以及調(diào)查研究的基礎(chǔ)上,[1]屬植物,系第三紀古熱帶植物區(qū)系的孑遺植物,為選取來自10個地區(qū)的黃檗遷地保護群體個體進行[2]常用中藥材關(guān)黃柏的基源植物,是我國
3、珍貴的藥用實驗(表1)。中國醫(yī)學科學院北京藥用植物園所保和用材樹種。曾廣泛分布于我國東北的吉林、黑龍護的7個遷地保護群體(THA,THB,JH,Q,W,F,江、遼寧等地,由于長期過量的林木采伐和不合理藥BJ)及中國科學院植物研究所植物園(南)(X)和北材采收,資源量越來越少,野生黃檗的生存狀況十分京植物園(北)(Y)所保護的2個遷地保護群體的樣嚴峻,極易陷入瀕危的狀態(tài),在5中國植物紅皮書)))品采幼嫩葉片放入自封袋中,-20e迅速冷凍保[3]稀有瀕危植物6第1冊中,黃檗被列為漸危種,國家存;哈爾濱國家森林植物園(H)的樣品采用10倍量2級保護植物。根據(jù)作者多年野外調(diào)研發(fā)現(xiàn),野生黃
4、的變色硅膠(青島海洋化工有限公司)12h內(nèi)快速檗多散生分布,且成年樹下很少有實生苗出現(xiàn),分布干燥。實驗采用北京鼎國生物技術(shù)有限公司的區(qū)持續(xù)縮小,因此開展黃檗保護研究已是勢在必行。FISH-AFLP試劑盒。DNA分子標記技術(shù)已廣泛用于瀕危植物遺傳表1黃檗遷地保護群體的取樣情況[4,5]多樣性研究,目前在評價遷地保護群體遺傳多種源地群體編號采集地取樣數(shù)/株樣性上也有利用[6]。擴增的限制性片段長度多態(tài)通化THA中國醫(yī)學科學院藥用植物園10[7]通化THB中國醫(yī)學科學院藥用植物園9性(amplifiedfagmentlengthpolymorphisms,AFLP)撫松F中國醫(yī)學科學院
5、藥用植物園10是一種高效的顯性遺傳標記,結(jié)合了RFLP的專一蛟河JH中國醫(yī)學科學院藥用植物園6性和RAPD技術(shù)的隨機性、高效性,是新一代的分泉陽Q中國醫(yī)學科學院藥用植物園3灣溝W中國醫(yī)學科學院藥用植物園5子標記技術(shù),本實驗采用熒光標記引物擴增產(chǎn)物在不詳BJ中國醫(yī)學科學院藥用植物園9[8]自動測序儀上掃描鑒定,分析和評價了遷地保護不詳Y北京植物園6黃檗群體的遺傳多樣性和保護效果。不詳X中國科學院北京植物所植物園4不詳H哈爾濱國家森林植物園51材料與方法1.2總DNA制備1.1材料[11,12]本實驗稱取材料012g,采用CTAB法提取DNA,018%瓊脂糖電泳檢測DNA純度、完整性
6、及產(chǎn)[收稿日期]2007-03-10-1量,DNA質(zhì)量濃度大約為50ng#LL。[基金項目]國家中醫(yī)藥管理局科學技術(shù)研究專項(04-05ZP07);北京市教委重點學科共建項目(XK100230448)1.3AFLP實驗[7][通訊作者]*張昭,Te:l(010)62899773,E-mai:lzhangzhao1962@AFLP方法參照VOS等的方法,其中酶切和連tom.com接采用一步法進行,預擴增反應參考北京鼎國生物技#1121#第33卷第10期中國中藥雜志Vo.l33,Issue102008年5月ChinaJournalofChineseMateriaMedicaMay,2
7、008術(shù)有限公司FISH-AFLP試劑盒說明。利用2組DNA別是P-GAA/M-CTG,P-GAA/M-CTT,P-GAC/M-CTT,樣品從64對AFLP引物中(Ps?t/Mse?)(表2)篩選出P-GAC/M-CAC,P-GTT/M-CAA,P-GTT/M-CAC,P-擴增圖譜清晰的8對引物對進行選擇性擴增反應,分GTT/M-CTG,P-GTT/M-CTT。表2AFLP接頭和引物序列DNA接頭和引物核苷酸序列備注Pst?接頭15c-CTCGTAGACTGCGTACATGCA-
