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《大豆gmsot1基因的克隆與功能研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIONSubmittedinPareialFulfillmentofRequirementforMASTERDEGREECloningandFunctionalStudyofGmSO刀GenefromSoybeanXieLu-yaoDirectedbyAssociateProfessorWenTao，ZhuMu—lan(CropFarmingSystemandCutivation)Chengdu，Sichuan，P．R。China，611130May2014萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)
2、性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，學位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書所使用過的材料。與我～同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：鋤癲重加咖年6月塵日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留并向圜家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段
3、保存、匯編學位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。壓戽論文不保密?？诒菊撐谋Ｃ?，在一年解密后適用本授權(quán)。(請在以上口內(nèi)劃“√”)研究生簽名：撒導(dǎo)師簽名f-；b乏l掃厶J}年舌月，≯曰2矽fv年‘月萬方數(shù)據(jù)摘要大豆[Glycinemax(L．)】屬于豆科植物，為人類提供大量的食用蛋白質(zhì)，也為工業(yè)生產(chǎn)提供重要的原料，是重要的經(jīng)濟和糧食作物。硫代葡萄糖苷(Glucosinolate，簡稱硫苷)是一種存在于十字花科植物巾含硫和氮的次生代謝產(chǎn)物，其水解產(chǎn)物具有抑制細菌、真菌增殖和抗蟲等功能。而磺酸基轉(zhuǎn)移酶(sulpho
4、transferase，簡稱SOT)是硫代葡萄糖苷(Glucosinolate，簡稱硫苷)核心結(jié)構(gòu)合成途徑中的關(guān)鍵酶之一，因而具有重要的地位。本研究采用反向遺傳學方法從大豆根系中提取RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，得到GmSOTl基因的編碼區(qū)(codingsequences，簡稱CDS)由1014bp的核苷酸組成，編碼一個長度為337個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。然后采用PCR方法擴增大豆GmSOTl基因，并將其連接到植物雙元表達載體pCAMBIA2301的多克隆位點上，且命名為pCAMBIA2301．35S：GmSOTl。而后用農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化方法將GmSOTl基
5、因整合到大豆植物體中。運用GUS染色和PCR方法篩選和檢測獲得了大豆轉(zhuǎn)基因植株。通過觀察表型，GmSOTl基因的過量表達和敲除后的轉(zhuǎn)基因植株在株型上都比對照更加矮小。基因敲除后的轉(zhuǎn)基因大豆種子相對于對照粒小、顏色更深，并且種子兩端有明顯的白化現(xiàn)象。為了研究GmSOTl基因在植物細胞內(nèi)的表達部位，本研究構(gòu)建了GmSOTlC端融合GFP的質(zhì)粒載體，通過煙草葉片瞬時表達后，在激光共焦顯微鏡下觀測GmSOTl基因可能在細胞膜和細胞核里行使其功能。為了改良轉(zhuǎn)基因大豆生根體系，本研究分別在抗性大豆生根起始外植體、IBA濃度和生根預(yù)處理三個方面進行研究。結(jié)果表明，帶胚軸
6、外植體不定根誘導(dǎo)比不帶胚軸外植體的效率更高；IBA達到1．0mg／L可以誘導(dǎo)出的根系更加健壯且移栽成活率高達74．88％；大豆不定根誘導(dǎo)外植體經(jīng)過預(yù)處理III后，即：1／8MSB5培養(yǎng)基培養(yǎng)5d，再轉(zhuǎn)入1／4MSB5培養(yǎng)基培養(yǎng)5d，最后轉(zhuǎn)入1／2MSB5+I．0mg／LIBA培養(yǎng)基里進行不定根誘導(dǎo)，將生根時間縮短到19．21d，生根頻率達到98．42％，從而使大豆遺傳轉(zhuǎn)化效率提高到23．6％。GmSOTl基因在大豆中的深入研究，不僅有助于了解磺酸基轉(zhuǎn)移酶在大豆硫苷合成中的分子機制和生理功能，還有望創(chuàng)制抗病性和固氮能力雙增的大豆新種質(zhì)。I萬方數(shù)據(jù)G朋SD丌基
7、因的功能的深入研究仍在繼續(xù)。關(guān)鍵詞：大豆；硫代葡萄糖苷；磺酸基轉(zhuǎn)移酶；克??；遺傳轉(zhuǎn)化Ⅱ萬方數(shù)據(jù)AbstractSoybean[Glyeinemax(L．)】whichisanimportanteconomicandfoodcropsblongstoleguminosae．providinga、析(1erangeofplantproteinsforhumanbeingandimportantrawmaterialforindustrialproduction．Glucosinolatesisakindofsecondarymetaboliteswithsul
8、furandnitrogen，whichexistint．hecr
