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《干旱脅迫下歐李幼苗的生理響應(yīng)與差異蛋白表達(dá)分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S14549學(xué)位論文干旱脅迫下歐李幼苗的生理響應(yīng)與差異蛋白表達(dá)分析指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：周麗娟宋興舜副教授東北林業(yè)大學(xué)碩士’學(xué)科專業(yè)：遺傳學(xué)2014年4月論文答辯日期：2014年6月東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期：2014年6月答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾必櫛素大學(xué)萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225RegisterCode：S14549DissertationfortheDegreeofMasterTheresponseofwaterstressonphysiologicalandproteom
2、iclevelsinCerasushumilisseedlingsCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof0ralExamination：University：ZhouLijuanA．Prof．SongXingshunJune，2014MasterofScienceGeneticsJune．2014NortheastForestry萬方數(shù)據(jù)摘要在干旱脅迫下，植物細(xì)胞通過干旱信號(hào)的感知和傳導(dǎo)來調(diào)節(jié)基因表達(dá)，蛋白質(zhì)變化，從而引起形態(tài)、生理、光合作用、呼
3、吸作用、抗氧化系統(tǒng)等各項(xiàng)指標(biāo)的變化。本研究以北京懷柔縣引進(jìn)的歐李(Cerasushumilis)種為實(shí)驗(yàn)材料，研究了2年生歐李幼苗正常供水(對(duì)照)、輕度干旱、中度干旱脅迫3種供水處理?xiàng)l件下，光合、呼吸和抗氧化系統(tǒng)等生理指標(biāo)，同時(shí)對(duì)重度干旱脅迫下歐李總蛋白的表達(dá)進(jìn)行分析，并通過RT-PCR對(duì)14個(gè)參與光合作用和呼吸作用等的基因表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。主要的研究結(jié)果如下：l在干旱脅迫下，歐李葉片中主要以過氧化物酶(POD)活性的增強(qiáng)來提高植物對(duì)干旱環(huán)境的適應(yīng)能力，而超氧化物歧化酶(SOD)、抗壞血酸過氧化物酶(APX)和谷胱甘肽還原酶(GR)的活性均降低。歐李葉片總呼吸速率加強(qiáng)，交替呼
4、吸和細(xì)胞色素呼吸兩條電子傳遞途徑也發(fā)生改變。交替呼吸隨時(shí)間的延長，速率升高，兩細(xì)胞色素呼吸則呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，這可能與植物細(xì)胞中水分的缺失有關(guān)。而可溶性糖含量的積累，有助于植物進(jìn)行滲透調(diào)節(jié)，緩解由于干旱給植物帶來的傷害。2成功構(gòu)建出具有高穩(wěn)定性和高重復(fù)性的歐李蛋白質(zhì)雙向電泳體系，得到高清晰度，高分辨率，高重復(fù)性的雙向電泳圖譜。具體針對(duì)能影響歐李蛋白質(zhì)雙向電泳效果的最適膠條pH范圍、膠條承載量、等電聚焦時(shí)間以及SDS．PAGE電泳的運(yùn)行條件等因素，進(jìn)行優(yōu)化對(duì)比實(shí)驗(yàn)，確定了各因素的最優(yōu)條件。我們比較了pH3．10與pH4．7范圍的膠條，發(fā)現(xiàn)在pH4．7上的膠條上的蛋白質(zhì)點(diǎn)最為清晰
5、、可靠。3通過軟件分析比對(duì)，干旱脅迫下的歐李蛋白質(zhì)出現(xiàn)顯著差異的點(diǎn)共有76個(gè)(變化量超過2倍，P≤0．05)。這76個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)中出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)的有14個(gè)，出現(xiàn)下調(diào)表達(dá)的有62個(gè)。通過MALDI．TOFMS和Q．TOFMS方法，我們將這76個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行分析鑒定。4根據(jù)蛋白質(zhì)功能分類，我們將48個(gè)蛋白質(zhì)歸為l1個(gè)功能組。主要包括：光合作用，碳和能量代謝，蛋白質(zhì)水解，蛋白質(zhì)合成，蛋白質(zhì)折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)，轉(zhuǎn)錄相關(guān)，脅迫和防御，膜和轉(zhuǎn)運(yùn)，細(xì)胞凋亡和其他代謝相關(guān)蛋白。另外，除了已經(jīng)發(fā)表過的已知功能蛋白，我們還發(fā)現(xiàn)了2個(gè)未知功能的蛋白。這些蛋白給干旱脅迫的分子響應(yīng)機(jī)制的深入研究奠定了基礎(chǔ)
6、和提供新的思路。5本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)已經(jīng)鑒定出來的69個(gè)蛋白質(zhì)中進(jìn)行挑選出14個(gè)蛋白質(zhì)，分別參與能量代謝、糖代謝、脅迫防御相關(guān)。在mRNA水平通過RT-PCR對(duì)這14個(gè)基因進(jìn)行表達(dá)分析，研究結(jié)果表明基因水平上的表達(dá)變化趨勢(shì)與蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化趨勢(shì)具有較高的相似性，表明質(zhì)譜鑒定結(jié)果具有較高的可靠性。關(guān)鍵詞歐李；差異蛋白質(zhì)組學(xué)；干旱脅迫；RT—PCR；生理萬方數(shù)據(jù)AbstractUnderdroughtstress，theplantcellregulatesgeneexpressionandproteinchangesbydroughtsignalperceptionandtra
7、nsmission，causingthechangeinthelevelsofmorphology,physiology，photosynthesis，respiration，andantioxidantsystem．Twoyears’Cerasushumilis(Huairou)seedlingswasusedinthisstudy．Wesetthreetreatments，normalwatersupply(contr01)，milddrought，moderatedroughtstress，andmeasuredthep
