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《銅綠假單胞菌代謝產(chǎn)物抗腫瘤活性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士學(xué)位論文銅綠假單胞菌代謝產(chǎn)物抗腫瘤活性研究作者：吳燕杰指導(dǎo)教師：楊樹林教授南京理工大學(xué)2014年3月M．D．DissertationStudiesonantitumoractivitiesofmetabolitesproducedbyPseudomonasaeruginosaWuYanyieSupervisedbyPr嘶№ngShu／／nNanjingUniversityofScience&TechnologyMarch，2014聲明本學(xué)位論文是我在導(dǎo)師的指導(dǎo)下取得的研究成果，盡我所知，在本學(xué)位論文中，除了加以標(biāo)注和致謝的部分外，不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或公布過的研究
2、成果，也不包含我為獲得任何教育機構(gòu)的學(xué)位或?qū)W歷而使用過的材料。與我一同工作的同事對本學(xué)位論文做出的貢獻均已在論文中作了明確的說明。學(xué)位論文使用授權(quán)聲明南京理工大學(xué)有權(quán)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部內(nèi)容，可以向有關(guān)部門或機構(gòu)送交并授權(quán)其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部內(nèi)容。對于保密論文，按保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。研究生簽名：墨堡壘協(xié)J爭年3月涉日碩士論文銅綠假單胞菌代謝產(chǎn)物抗腫瘤活性研究摘要銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)是一種常見的革蘭氏陰性菌，其次級代謝產(chǎn)物在環(huán)境、工業(yè)、醫(yī)藥等行業(yè)有良好
3、的應(yīng)用前景。如鼠李糖脂作為一種用途廣泛的生物表面活性劑，兼具加快傷口愈合、防治藻類、抑制微生物生長等生物活性；綠膿菌素是一種小分子吩嗪類藍色色素，具有較強的氧化還原活性，可擴散并滲透進入細胞膜，過量產(chǎn)生氧自由基導(dǎo)致細胞死亡。本研究對模擬空間環(huán)境條件誘變得到的高產(chǎn)鼠李糖脂突變菌株P(guān)aeruginosaM14808進行發(fā)酵，分離、純化其次級代謝產(chǎn)物并表征鼠李糖脂的化學(xué)結(jié)構(gòu)，研究鼠李糖脂及綠膿菌素的抗腫瘤活性，并探討其作用機制。主要研究結(jié)果如下：1．結(jié)構(gòu)表征結(jié)果表明，從發(fā)酵液中分離、純化得到的鼠李糖脂主要為雙鼠李糖脂Rh2CloClo。該物質(zhì)對人乳腺癌細胞MCF．7增殖的抑
4、制作用明顯，可增強衰老相關(guān)B．半乳糖苷酶活性。AO／EB染色、DNAladder、caspase．3活性及p53、bax、bcl．2、casepase．3、caspase一9、Fas基因表達水平的檢測結(jié)果表明，雙鼠李糖脂促使MCF．7細胞壞死。2．對種子液進行分離、純化，得到綠膿菌素。綠膿菌素能夠抑制人非小細胞肺癌細胞A549及人肝癌細胞HepG2的生長，且呈劑量依賴關(guān)系。AO／EB染色、DNAladder及單細胞凝膠電泳檢測提示綠膿菌素可誘導(dǎo)腫瘤細胞發(fā)生凋亡。進一步研究表明綠膿菌素能誘導(dǎo)A549和HepG2細胞內(nèi)ROS水平升高，caspase．3活性增強，抗氧化物質(zhì)
5、含量隨之改變。HepG2細胞內(nèi)p53、caspase．9、bax及PIG3mRNA表達水平顯著升高，bcl．2／bax比值降低。抗氧化劑N．乙?；甃．半胱氨酸(NAC)預(yù)處理后，A549和HepG2細胞的生存能力顯著增強，氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)及各基因表達水平均有所改善。實驗結(jié)果表明：綠膿菌素誘導(dǎo)A549和HepG2細胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激，并進而引起HepG2細胞內(nèi)p53基因和線粒體途徑介導(dǎo)的細胞凋亡。關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌，雙鼠李糖脂，-綠NNN，抗腫瘤活性，氧化應(yīng)激，細胞凋亡AbstractPsP“domonasaeruginosaisacommongram-negative
6、bacterium·ThisbacteriumcanproducesecondarymetaboliteswhichshowgoodapplicationfutureInenvironment，medlclnea11dindustⅣ．Asakindofbiosurfactantwithextensiveuse，rhamnolipidstillshowobviousbi0109icalactivities，suchasspeedingwoundheaiing，inhibitingalgagrowth，antibactenalactivity,andSOon．Pyocya
7、ninisabluephenazinepigment嘶t11strongredoxactivity．PyocyanincaIleasilypenetratemembranes，produceexcessfreeradicalandresultmcelldeath．Inthisdissertation，thehighrhamnolipidproducingstrainPseudomonasae廠u97玎os口M14808mutatedbysimulatedspaceconditionwasusedforfermentation·Secondarymet
