資源描述：
《表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型sh1分離株cap蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建與鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)２０１０，４０（１１）：１１５６－１１６０ＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅ中圖分類號(hào)：Ｓ８５２．６５９．２文獻(xiàn)標(biāo)志碼：Ａ文章編號(hào)：１６７３－４６９６（２０１０）１１－１１５６－０５表達(dá)豬圓環(huán)病毒２型ＳＨ１分離株Ｃａｐ蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建與鑒定李文良，王先煒，馬濤，李玉峰，姜平＊（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與免疫重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京２１００９５）摘要：通過(guò)ＰＣＲ方法擴(kuò)增完整的豬圓環(huán)病毒２型（ＰＣＶ２）ＯＲＦ２基因，隨后將其克隆到Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)ｐＦａｓｔＢａｃＴＭＨＴＢ載體中，將篩選獲得的陽(yáng)性重組質(zhì)粒ｐＦ－Ｃａｐ轉(zhuǎn)化至
2、含有桿狀病毒穿梭載體的ＤＨ１０Ｂａｃ感受態(tài)大腸桿菌中，經(jīng)藍(lán)白菌落篩選和ＰＣＲ鑒定，獲得重組表達(dá)載體ｒＢａｃ－Ｃａｐ。在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Ｓｆ９昆蟲細(xì)胞，獲得重組桿狀病毒ｒＡｃ－Ｃａｐ。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和間接免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果表明，成功構(gòu)建了表達(dá)ＰＣＶ２Ｃａｐ蛋白的重組桿狀病毒，表達(dá)的蛋白具有良好的反應(yīng)原性，這為進(jìn)一步研究Ｃａｐ蛋白的功能及免疫學(xué)特性奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒２型；ＯＲＦ２基因；桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＣａｐｐｒｏｔｅｉｎ
3、ｏｆｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２ＳＨ１ｉｓｏｌａｔｅＬＩＷｅｎ－ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧＸｉａｎ－ｗｅｉ，ＭＡＴａｏ，ＬＩＹｕ－ｆｅｎｇ，ＪＩＡＮＧＰｉｎｇ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅｓＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ／ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅＯＲＦ２ｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＰＣＶ２）ＳＨ１ｉ
4、ｓｏｌａｔｅＴＭｂｙＰＣＲａｎｄｔｈｅｎｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｄｏｎｏｒｖｅｃｔｏｒｐＦａｓｔＢａｃＨＴＢｏｆＢａｃ－ｔｏ－ＢａｃＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓ－ｔｅｍ．Ａｆｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐＦ－ＣａｐｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｓｃｈｅ－ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＤＨ１０Ｂａｃｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｓｈｕｔｔｌｅｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅｗｈｉｔｅｃｏｌｏｎｉｅｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａ
5、ｎｔｂａｃｍｉｄｒＢａｃ－ＣａｐｗａｓｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ．ＴｈｅｎｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳｆ９ｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｒＡｃ－Ｃａｐｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｓｓａｙｗｉｔｈａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔＣａｐｐｒｏｔｅｉｎ．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＣａｐｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙｌａｉｄｔｈｅｆｏ
6、ｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏ－ｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＣａｐｐｒｏｔｅｉｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＰＣＶ２）；ＯＲＦ２ｇｅｎｅ；ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ豬圓環(huán)病毒２型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，生長(zhǎng)遲緩、貧血、消瘦、呼吸困難、黃疸；還可引起感ＰＣＶ２）是近年來(lái)危害養(yǎng)豬業(yè)的重要病原之一，與斷染豬的免疫抑制，并與多種病毒、細(xì)菌性疾病混合感［３－４］奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（ＰＭＷ
7、Ｓ）、豬皮炎腎病綜染，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)其致合征（ＰＤＮＳ）、豬呼吸道病以及繁殖障礙等疾病的病機(jī)理和免疫預(yù)防的研究日益成為當(dāng)前的熱點(diǎn)。［１－２］發(fā)生密切相關(guān)?，F(xiàn)在已經(jīng)使用豬圓環(huán)病毒相關(guān)ＰＣＶ２屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是迄今發(fā)疾?。ǎ校茫郑粒模┻@一名詞來(lái)概括表示與ＰＣＶ２有關(guān)現(xiàn)的最小的動(dòng)物病毒，直徑僅為１７ｎｍ，無(wú)囊膜，其［２］的所有疾病。ＰＣＶ２感染可以造成５～１２周齡豬基因組為一條長(zhǎng)約１．７６ｋｂ的共價(jià)閉合環(huán)狀單鏈?zhǔn)崭迦掌冢海玻埃保埃埃罚埃?；修回日期：２０１０－０９－３０基金?xiàng)目
